膜设备提取黄浆水蛋白

⑴ 细胞破碎后，用缓冲液提取蛋白质，用什么方法能得到蛋

细胞破碎后，用缓冲液提取蛋白质，用什么方法能得到蛋
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：

（一）材料的预处理及细胞破碎

分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：

1. 机械破碎法

这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。

2. 渗透破碎法

这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。

3. 反复冻融法

生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。

4. 超声波法

使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。

5. 酶法

如用溶菌酶破坏微生物细胞等。

(二) 蛋白质的抽提

通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。

（三）蛋白质粗制品的获得

选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：

1. 等电点沉淀法

不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。

2. 盐析法

不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。

3. 有机溶剂沉淀法

中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。

（四）样品的进一步分离纯化

用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。

⑵ 如何提取大豆中的蛋白质（至少两种方法）、a、b两种大豆蛋白如何区别其纯度高低

可以使用上海生工的一步法植物活性蛋白提取试剂盒 BSP004

⑶ nf纳滤膜应用在蛋白质提取的过程中有什么优势

蛋白质提取分离浓缩设备的特点

1、纳滤膜分离设备浓缩能耗低，仅为热浓缩的30%，为企业节约成本。

2、纳滤膜分离设备操作简单，占地面积小，设备自动运行，维护方便。

3、纳滤膜分离设备可拓展性好，容易实现工业化扩产需求。

4、前端除杂，提高胶原蛋白品质和口感。

5、纳滤膜分离设备浓缩同时，脱出酶解液中的无机盐，降低苦腥味和农残。

6、缩短生产周期，提成生产效率。

7、纳滤膜分离设备常温浓缩，蛋白生物活性基本不受影响。

将纳滤膜分离设备技术结合传统提取、分离、浓缩工艺，对传统工艺进行技术改造和革新，致力于为企业降低综合生产成本，提高产品质量，优化了膜提取分离浓缩胶原蛋白工艺。

⑷ 总膜蛋白提取试剂盒的原理是什么

外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。
内在膜蛋白与膜结合非常紧密，是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的离心速度去掉胞质蛋白等，然后用去污剂把蛋白从膜中释放出来。膜蛋白分离纯化的重要步骤是选择适当的增溶用表面活性剂，一般常用的有胆酸盐，CHAPS(一种离子去污剂），Emulgen和Lubrol等表面活性剂。 
有专门的试剂盒效果好一些

⑸ 细胞培养液中蛋白的提取方法

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.
1、透析袋浓缩法
利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替）,结扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.
2、冷冻干燥浓缩法
这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分.它是在冰冻状态下直接升华去除水分.具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等）.密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态.数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末.干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用.也可采用冻干机进行冷冻干燥.
3、吹干浓缩法
将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹.此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15 ℃.
4、超滤膜浓缩法
此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的.有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出.
5、凝胶浓缩法
选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中.根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量.放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去.
6、浓缩胶浓缩法
浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能.每克干胶可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10000分子量以上的生物大分子物质.浓缩后,蛋白质的回收率可达80％～90％.比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可.必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率.
（转的!不过也希望能帮到你）

⑹ 请问，纳滤膜能用于蛋白提取，蛋白浓缩吗需要的设备有哪些

可以用特种分离膜设备对蛋白质提取，纳滤可以对氨基酸进行分离浓缩了，内所以完容全可以对蛋白质进行浓缩分离。
至于设备，一般的水处理公司都会有，如果项目不大的话一般都需要增压泵，高压泵，滤芯，膜元件，膜管，膜架，以及对膜元件的清洗系统等。

⑺ 如何将膜上的蛋白从细胞膜上分离出来

分离细胞膜蛋白的方法：

1、冰上刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂专的缓冲液属 A 中，于室温与液氮罐中反复冻融 2 次。

2、5000 转 4 度离心，驱除核及未裂解的细胞。

3、取上清 12000 转 4 度离心 10 分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液 B 中。

4、12000 转 4 度离心 10 分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液 C 中提取后测蛋白浓度 ,SDS-PAGE 电泳，分装后 -20 度保存备用。

buffer A : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4)

buffer B : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4) 1mM EGTA

buffer C : 0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf,50mMTris-cl(PH=7.0),

⑻ 哪种蛋白提取试剂盒能同时提取膜蛋白与胞浆蛋白

免疫组化中，所染色的蛋白的位置与该蛋白的特性有关系。在现有所研究的蛋白中，不少蛋白存在核转位的情况， 也就是说当细胞培养的环境或者刺激的因素不同，该蛋白会出现从胞浆到细胞核的表达位置的改变。有时候表达不变仅仅是从胞浆转位到细胞核，有时候还伴有表达的上调，比如nf-kb。

⑼ 如何将膜分离技术用于蛋白质的分离在线等…

这个应该是发酵话题吧。
第一步，一般是细菌培养。
第二步，破菌
第三步，微滤除浊
第四步，超滤提纯（分子量切割）
第五步，超滤浓缩或NF浓缩

一般来说，膜在第三步骤开始起到作用。

⑽ 求助：怎么提取细胞上清液中的蛋白

怎么提取细胞上清液中的蛋白 western blot中蛋白样品调节浓度有很多方法 先检测出各个蛋白样品的浓度，根据体积通过不同单位的Loading buffer将样品稀释成不同的体积，即可以保证各个蛋白样品浓度一致 或者在样品裂解的时候，用裂解液或者PBS去稀释蛋白样品，达到调节浓度的。细胞比较简单，只有细胞膜，抽提过程中，很容易破坏细胞膜，从而得到蛋白，相应蛋白中受到其他物质干扰也比较少，样品较为干净。但是用组织的时候，组织由细胞组成，但是从组织中抽提丹巴就要复杂，做组织匀浆以后，再分离组织碎片和蛋白，但是分离过程可能没有那么好，组织中含有的各种杂质，杂蛋白就比细胞中要多，要复杂。因此选择适当的方法提取组织蛋白，对于后续的Western来说还是非常重要的，这也是为什么细胞的蛋白做WB挺好，但是换到组织，可能有些条件就需要进一步优化了。