A. 透射电镜肾脏取材细切
透射电镜生物样品制备步骤
生物样品, 透射电镜, 制备步骤
一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时型信族
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
三.脱水:
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮(1:1) 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮 室温 15-20分三次
四.包埋:
纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五.固化:
37度烘箱内 过夜
45度烘箱内 12小时
60度坦滑烘箱内 24小时
六.超薄切片机切片 50-60 nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.透射电镜观察。拍片
由于生物样品含水太多,在电镜中会被真空卜弊蒸发掉从而破坏了结构,所以需要一些能够把水温和取代掉、并且自身没有结构的物质,这就是树脂包埋剂。正因为生物脆弱、结构容易破坏,所以才需要温和的制样方法,方法才这么复杂。生物电镜制样就是最主要的工作,看电镜倒是次要的。以下是生物样品超薄切片的流程图:
B. 扫描电镜用的导电树脂,国内哪家有
大家经常把金相样品拿来直接做扫描电镜,这样可以把二者的内容统一起来,但回是一答般镶嵌树脂是不导电的,所以电镜检测的效果不理想。目前市面上的导电树脂一般有两种导电机理,一种是石墨导电,另外一种是金属导电,所以你可以选择适合你的类型。进口顶级品牌的当然没有问题,国内可以替代进口产品应该算上海川禾吧,我也找了很多综合感觉他们最有实力,你自己再看看吧,希望对你有帮助。
C. 一般显微观察样品的预处理,主要包括什么
在光学显微镜的样品制备过程中,样品的切片厚度在2~25um之间;电镜的切片厚度在50-100nm以内(高压电镜除外,其样品厚度可达到1um),所以采用的切片方法,也不尽相同。
在载体方面,光学显微镜的的切片的载体是玻片,而电镜切片的载体是载网。
在固定方面,光学显微镜的切片使用复合固定液固定,而电镜切片,只用单一固定液进行重复固定
在染色方面,光学样品的染色较为简单,根据不同的观测样品及光学显微镜的类型,通常以固定的一些染色剂染色就行了。而电镜样品再染色方面的方法很多,而且也很复杂,比如负染色、银染色等等。
在包埋方面,光学显微镜切片使用石蜡、火棉胶、明胶等做包埋剂;电镜切片则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂等做包埋剂。
D. 用10%的甲醛固定的组织是不是不能再做电镜观察
不可以,甲醛里还有甲醇对超微结构破坏很大,如销源果你做的一般亏带态诊断电镜,有的做电镜具有一定的诊断价值,但如果是研究组织的超微结构不能用甲醛固定液,一行携定要用戊二醛。
E. 扫描电镜可以用石蜡包埋吗
不可以。组织经过固定、脱水、透明和浸蜡等过程后枝消,扫描电镜银搭厅用包埋剂将组织块包埋成块,不可以使用石蜡,而是使用环氧树脂+硬化剂,使得锋隐组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却。扫描电镜是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观性貌观察手段,可直接利用样品表面材料的物质性能进行微观成像。