视神经树脂包埋

A. 电镜的标本为什么要脱水

1.透射电镜的电子束是要穿透样本而因原子密度差异显示出明暗图像的，因此要求样品得非常薄（百纳米级），但我们不可能用刀直接对着一个细胞切，因此要把它包埋在树脂中对树脂进行超薄切片。因为树脂是脂类，因此样品得是脂溶性的，用乙醇或丙酮对样品进行脱水就行了。
扫描电镜对样品镀膜也得先脱水
2.某人说离体细胞处于低大气压下，膜结构容易被破坏。
3.但有资料说1980年我们已经可以用电镜观察湿样品.

B. 透射电镜样品制备方法是什么

透射电镜试样制备：

一、实验内容及目的：了解透射电镜对试样的要求，熟悉透射电镜试样的制备过程，制备一个合格的透射 电镜试样。

二、薄膜样品的制备：用于透射电镜下观察的试样厚度要求在50-200nm 之间，对于不导电的陶瓷材料和脆性材料，最终减薄可采用离子减薄法。

该法是用离子束在样品的两侧以一定的倾角（5-30）轰击样品，使之减薄。由于陶瓷样品硬度高，耐腐蚀，因此，离子减薄的时间长。对于要求较高的金属薄膜样品，在双喷后再进行一次离子减薄，效果会更好。

预减薄

预减薄的目的在于使圆片的中心区域进一步减薄，以确保最终在圆片的中心部位穿孔(其边缘附近区域可供观察)，预减薄通常采用专用的机械研磨机，使中心区域减薄至约10μm厚，借助于微处理器控制的精密研磨有时可以获得使电子束透明的厚度(<1μm)．有时也用化学方法进行预减薄。

以上内容参考：网络-样品制备

C. 812包埋剂的配方

用于透射电镜样品的包埋液,数年来一直延用几种固定的配方,即常用的812、国产树脂618、Spurr等等,各种包埋剂各有其优缺点.
Spurr包埋剂:粘度低,浸透容易,包埋聚合时间短,硬度及韧性均很好,经免疫标记的样品,常用此液进行包埋.另外还可用于难以浸透、硬度高、致密性较高组织.但此包埋液价格昂贵,不宜作为常规的包埋液来使用.
812包埋液:粘度低,韧性好,易切出较大的超薄切片,但组织包埋块易吸潮,不易保存 ,包埋液的价格也较高.
国产树脂618:价格便宜,购买方便,组织块不易吸潮,保存方便,切割性能较好.但此包埋液粘度高,浸透速度缓慢,配制时不易搅拌均匀.
根据以上常用的几种包埋液的优缺点,我室经数年的摸索,按自己的条件,重组了国产61 8树脂包埋液配方:
618环氧树脂 5ml
DDSA(十二碳烯基丁二酸酐) 2ml
MNA(甲基内次甲基四氢邻苯二甲酸酐) 2.5ml
DBP(苯二甲酸二丁酯) 1ml
DMP-30(2-4-6-三(二甲氨基甲基)苯酚) 0.11ml
该包埋液中的增塑剂DBP可根据季节的变化或组织的硬度进行适当的调整(冬季包埋时, DBP可增加至1.5ml,使包埋块的韧性增加).
此配方的优点是:粘度降低,浸透力增强,聚合后的组织块颜色淡黄,硬度均等,韧性良好 ,切割性能较佳.经我室数年使用,对不易制片的眼球、耳蜗、皮肤、血管等组织,均取得了较好的超薄切片效果,现已成为我室的常规配方.