亲和flag树脂

1. 基因与flag融合表达会影响基因功能吗

能够判断目的基因的转染效率
2.能够对目的蛋白的表达进行定量，比如通过测定荧光强度转化为量化值，间接反应目的蛋白表达的强度
3.由于PEGFP质粒带有筛选标志，还可以进行稳定转染的筛选，标记上荧光，有利于稳定转染的筛选。
我个人认为1和3没有什么问题，但对2来说 我认为最好用WESTERN来定量，用GFP的抗体就可以。
MYC，HIS6，除了用作亲和纯化的标记，还可标记目的蛋白，由于他们很小，不会干扰目的蛋白的活性，不象GFP200多AA，所以有人在构建时常在目的基因和GFP 之间添加连接肽，以免目的蛋白与GFP相互影响。

2. 求英文翻译

使用以下抗体：myc（9b11，细胞信号），Chk2（BD Biosciences），hRad50（新闻，nb100-154ss），hubr5（EDD）（圣克鲁斯，sc-9562），旗（σ，f7425）或HA（科文斯，16b12），γH2AX（微孔，jbw301），53BP1（新闻，铌100-304），GFP（Invitrogen，a6455），BRCA1（x余礼物），RNF168（D.迪罗谢礼物）和FK2（微孔，04-263）。免疫沉淀后抗体：myc（9b11，细胞信号）和标记M2亲和凝胶（σ，a2220）。免疫荧光实验量化是由至少200的细胞数进行计数的条件。从三个独立的实验数据被用来计算平均值和标准deviation.shrnaplko慢病毒载体被用来表达对下面的靶向序列的shRNAs：5′- gctcagtatttaccaagaatt-3′（brcc3），5′- gtccatccaagtggagtacat-3′（分布），5′- cccattcagtatcctggctt-3′（RAP80）和5′- aaccagatgtctgtactaagg-3′（BRCA1）。与iddr regionhek293细胞相互作用蛋白的纯化转染标记或标记trf1iddr TRF1旗旗。细胞裂解（50？–毫米的Tris HCl，pH值？7.5 150？mM NaCl，1？毫米EDTA缓冲液，0.5%的Triton X-100）和免疫纯化的抗旗琼脂糖树脂（西格玛）。洗涤后，蛋白质的肽竞争洗脱（σ）旗。质谱分析的样品进行变性，还原和烷基化的胰蛋白酶消化前一夜。

3. flag标签作用

可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来，可以连接在目的蛋白的C端或N端， 然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞抑或受精卵中。

后续检测主要通过FLAG-tag这段肽链形成的免疫决定簇与其单克隆抗体的特异性结合来实现。 检测手段有免疫荧光(immunofluorescence)， 免疫印记(Western Blotting)等。

随着生物技术的发展，科研人员可以通过DNA重组技术，构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白，进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化，以达到研究的需求。

(3)亲和flag树脂扩展阅读

FLAG-tag类别：

1、Flag抗体-抗Flag标签抗体

融合标签，如Flag、GST等标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。

2、GST抗体-抗GST标签抗体

随着越来越多的新基因的发现，基因融合蛋白表达体系以其在新发现蛋白研究中的显著优势已得到广泛应用。其中GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点。

3、HA抗体-抗HA标签抗体

融合标签，如HA、His等标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。常用的标签包括myc、HA、Flag、His、GST等。

4. Android 编程中，为什么设置了 Intent.FLAG

Intent
FLAG介绍:
(1)
FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK:
设置此状态，记住以下原则，首先会查找是否存在和被启动的Activity具有相同的亲和性的任务栈（即taskAffinity，注意同一个应用程序中的activity的亲和性一样，所以下面的a情况会在同一个栈中，前面这句话有点拗口，请多读几遍），如果有，刚直接把这个栈整体移动到前台，并保持栈中的状态不变，即栈中的activity顺序不变，如果没有，则新建一个栈来存放被启动的activity
a.
前提:
Activity
A和Activity
B在同一个应用中.
操作:
Activity
A启动开僻Task堆栈(堆栈状态:
A),
在Activity
A中启动Activity
B,
启动Activity
B的Intent的Flag设为
FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Activity
B被压入Activity
A所在堆栈(堆栈状态:
AB).
原因:
默认情况下同一个应用中的所有Activity拥有相同的关系(taskAffinity).
b.
前提:
Activity
A在名称为"TaskOne应用"的应用中,
Activity
C和Activity
D在名称为"TaskTwo应用"的应用中.
操作1:
在Launcher中单击"TaskOne应用"图标,
Activity
A启动开僻Task堆栈,
命名为TaskA(TaskA堆栈状态:
A),
在Activity
A中启动Activity
C,
启动Activity
C的Intent的Flag设为FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Android系统会为Activity
C开僻一个新的Task,
命名为TaskB(TaskB堆栈状态:
C),
长按Home键,
选择TaskA,
Activity
A回到前台,
再次启动Activity
C（两种情况1.从桌面启动；2.从Activity
A启动，两种情况一样）,
这时TaskB回到前台,
Activity
C显示,
供用户使用,
即:
包含FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK的Intent启动Activity的Task正在运行,
则不会为该Activity创建新的Task,
而是将原有的Task返回到前台显示.
操作2:
在Launcher中单击"TaskOne应用"图标,
Activity
A启动开僻Task堆栈,
命名为TaskA(TaskA堆栈状态:
A),
在Activity
A中启动Activity
C,启动Activity
C的Intent的Flag设为FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Android系统会为Activity
C开僻一个新的Task,
命名为TaskB(TaskB堆栈状态:
C),
在Activity
C中启动
Activity
D(TaskB的状态:
CD)
长按Home键,
选择TaskA,
Activity
A回到前台,
再次启动Activity
C(从桌面或者ActivityA启动，也是一样的),
这时TaskB回到前台,
Activity
D显示,供用户使用.说明了在此种情况下设置FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK后，会先查找是不是有Activity
C存在的栈，根据亲和性(taskAffinity)，如果有，刚直接把这个栈整体移动到前台，并保持栈中的状态不变，即栈中的顺序不变
(2)
FLAG_ACTIVITY_CLEAR_TOP:
前提:
Activity
A,
Activity
B,
Activity
C和Activity
D在同一个应用中.
操作:
Activity
A启动开僻Task堆栈(堆栈状态:
A),
在Activity
A中启动Activity
B(堆栈状态:
AB),
在Activity
B中启动
Activity
C(堆栈状态:
ABC),
在Activity
C中启动Activity
D(堆栈状态:
ABCD),
在Activity
D中启动Activity
B,
启动Activity
B的Intent的Flag设置为FLAG_ACTIVITY_CLEAR_TOP,
(堆栈状态:
AB).
(3)
FLAG_ACTIVITY_BROUGHT_TO_FRONT:
前提:
Activity
A在名称为"TaskOne应用"的应用中,
Activity
C和Activity
D在名称为"TaskTwo应用"的应用中.
操作:
在Launcher中单击"TaskOne应用"图标,
Activity
A启动开僻Task堆栈,
命名为TaskA(TaskA堆栈状态:
A),
在Activity
A中启动Activity
C,启动Activity
C的Intent的Flag设为FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
Android系统会为Activity
C开僻一个新的Task,
命名为TaskB(TaskB堆栈状态:
C),
在Activity
C中启动
Activity
D(TaskB的堆栈状态:
CD),
长按Home键,
选择TaskA,
Activity
A回到前台,
在Activity
A中再次启动Activity
C,
在启动Activity
C的Intent中设置Flag为FLAG_ACTIVITY_BROUGHT_TO_FRONT,
TaskB回到前台,
Activity
C显示,
(TaskB的堆栈状态:
C).
(4)
FLAG_ACTIVITY_MULTIPLE_TASK:
与FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK结合使用,
首先在Intent中设置FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK,
打开Activity,
则启动一个新Task,
接着在Intent中设置FLAG_ACTIVITY_MULTIPLE_TASK,
再次打开同一个Activity,则还会新启动一个Task.
(5)
FLAG_ACTIVITY_SINGLE_TOP:
当前Task堆栈中存在ABCD四个Activity,
A是栈顶Activity,
D为栈底Activity,
存在打开A的Intent中设置了
FLAG_ACTIVITY_SINGLE_TOP标志,
则会使用栈顶A,
而不会从新New
A.
(6)
FLAG_ACTIVITY_RESET_TASK_IF_NEEDED:
一般与FLAG_ACTIVITY_CLEAR_WHEN_TASK_RESET结合使用，如果设置该属性，这个activity将在一个新的task中启动或者或者被带到一个已经存在的task的顶部，这时这个activity将会作为这个task的首个页面加载。将会导致与这个应用具有相同亲和力的task处于一个合适的状态(移动activity到这个task或者从中移出)，或者简单的重置这个task到它的初始状态
FLAG_ACTIVITY_CLEAR_WHEN_TASK_RESET：在当前的Task堆栈中设置一个还原点，当带有FLAG_ACTIVITY_RESET_TASK_IF_NEEDED的Intent请求启动这个堆栈时(典型的例子是用户从桌面再次启动这个应用)，还原点之上包括这个应用将会被清除。应用场景：在email程序中预览图片时，会启动图片观览的actvity，当用户离开email处理其他事情，然后下次再次从home进入email时，我们呈现给用户的应该是上次email的会话，而不是图片观览，这样才不会给用户造成困惑。
例:
存在Activity
A,
Activity
B,
Activity
C,
Activity
A启动开僻Task堆栈,
命名为TaskA(TaskA堆栈状态:
A),
在Activity
A中启动Activity
B(TaskA堆栈状态:
AB),
接着Activity
B启动Activity
C(TaskA堆栈状态:
ABC),
启动Activity
C的Intent中设置FLAG_ACTIVITY_CLEAR_WHEN_TASK_RESET标题,
这样TaskA中有一个还原点,
当有包含FLAG_ACTIVITY_RESET_TASK_IF_NEEDED的Intent请求TaskA堆栈时(比如请求Activity
A)
系统就会将还原点以上的Activity清除,
TaskA堆栈中只剩下了AB.

5. 内参抗体和标签抗体有哪些

标签抗体（Tag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，籍以分析检目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。
亲和性标签
亲和标签大都有特异性的配基，利用这些配基可以方便的用亲和层析的方法对融合蛋白进行分离和纯化。
共同特点：
● 纯化方便，一般通过一步纯化就可以获得纯度和质量比较好的融合蛋白；
● 标签对目的蛋白的三维结构或是生物学活性影响很小；
● 标签易于切除；
● 纯化过程中可以对目的蛋白进行简单而精确的测量；
● 适用于大量不同蛋白质的表达。
Flag标签
Flag标签是由八个亲水氨基酸构成的一段寡肽，序列为Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可用于蛋白纯化及检测。
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作用机理
● Flag序列的第二个氨基酸是酪氨酸(Tyr)，属于芳香族氨基酸，是抗原-抗体特异性反应的主要因素；
● 位于N端带负电的天冬氨酸(Asp)可辅助酪氨酸的抗原性；
● 靠近C端的六个氨基酸( Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成一个亲水序列，可能形成高度暴露的三位蛋白质构型在理论上可使序列达到最大的亲水性，大大增强了Flag融合标签的抗原性。
优点
● 序列短小，只用条人工合成的寡核苷酸链就可以编码；
● 结晶条件时Flag融合蛋白的构象与单纯目的蛋白的构象几乎完全相同，通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的性质和功能，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究；
● 融合有Flag标签的目的蛋白，可以直接通过Flag进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高；
● 抗Flag的抗体可有效识别Flag标签，这样就方便通过 Western blot、ELSA等方法对含有Flag的融合蛋白进行检测、鉴定；
● Flag融合标签含有一个肠激酶切割位点，肠激酶可以识别该短肽C端的五个氨基酸( Asp-Asp- Asp-Asp-Lys)，通过肠激酶处理除去标签后即可获得天然的非融合蛋白质。
Flag标签抗体可以应用于检测和Flag标签融合蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化或定量检测Flag融合表达蛋白等。
His标签
His-tag由人工合成的组氨酸首尾相连构成，通常由6个氨基酸（HHHHHH）组成，也有3个和8个的情况。另外，也存在一种由19个组氨酸构成的天然多聚组氨酸标签（HAT-tag)。
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作用机理
● 多种宿主细胞已被证实可用于His融合标化重组蛋白，包括:细菌、酵母、哺乳动物细胞、杆状病毒感染的昆虫细胞；
● His标签能在变性条件下纯化蛋白，故己经聚集成包涵体的蛋白可溶解在适当的溶剂中(如:尿素、盐酸胍)；
● His融合标签可以很容易通过PCR技术，利用聚合酶与目的基因连接在一起。一般情况下将His融合标签添加在重组蛋白质的N端或C端，但添加在哪端需根据实际情况，最佳添加位置是针对特定蛋白而言的；
● 虽然多聚组氨酸融合标签因为分子量小且带电荷而几乎不影响蛋白质的活性，但是通常不能完全排除亲和标签影响其蛋白质活性的可能，因此一般会选择在变形条件下进行蛋白纯化来避免这种现象的发生。

不能用此法纯化的情况： ①由于金属离子可被吸附到次氮基三醋酸(NTA)树脂，带金属离子中心的蛋白质不可纯化；
②由于N2NTA可被还原，在厌氧条件下也不要使用该办法。
优点
● 分子量小，只有约0.84KD，一般不影响目标蛋白的功能；
● 既可纯化疏水性强的蛋白(非离子型表面活性剂存在的条件下)，也可纯化包涵体蛋白(变性条件下)；
● 可被用于蛋白质蛋白质、蛋白质DNA相互作用研究:可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；
● 可以和其它的亲和标签一起构建双亲和标签。
HA标签
HA融合蛋白也是一种小肽，由9个氨基酸组成( YPYDVPDYA)，其来源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇。对外源目的蛋白的空间结构影响较小，容易构建成标签蛋白融合到N端或者C端。易于用抗HA抗体检测和ELSA检测。
c-myc标签
C-myc标签即人原癌基因产物myc蛋白表位，是一个由11个氨基酸残基构成的小标签，其序列为 GIu-GIn-Lys-eu- le-Ser-Glu-Glu-ALeu。这11个氨基酸作为抗原表位在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。其对应单抗既可用于C-myc融合蛋白的免疫印迹和免疫沉淀，还可用于流式细胞术分析。C-myc标签也已广泛用于在酵母、细菌、昆虫及哺乳动物等表达体系中重组蛋白的检测和鉴定。
GST标签
GST即谷胱甘肽-S-转移酶，具有解毒作用，可将谷胱甘肽中的硫基转移至含硝基或卤化物的复合物中。其天然大小为26KD。
作用机理
● 应用于原核表达：
①作为一种高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性；
②在大肠杆菌中大量表达，起到提高表达量的作用。
● GST标签蛋白可在温和、非变性条件下洗脱，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性；
● GST在变性条件下会失去对谷胱甘肽树脂的结合能力，因此不能在纯化缓冲液中加入强变性剂（如：盐酸胍或尿素等）；
● GST融合蛋白已经成为分子生物学领域的基本工具，其广泛用于研究蛋白质-DNA及蛋白质-蛋白质间的相互作用，也可作为抗原用于免疫学或疫苗的研究。
非亲和标签
非亲和标签的作用不是用来纯化重组蛋白，而是用于检测重组蛋白的表达、分布，帮助重组蛋白正确折叠以及保护融合蛋白免受宿主细胞降解等。
绿色荧光蛋白( green fluorescent protein，GFP)
GFP是发光生物体内广泛存在的一类蛋白质，不需要激发即可发出一定波长的荧光，因此被广泛用于蛋白质在活细胞体内的空间定位、运动变化等的研究。
● 最新研究表明GFP融合蛋白可以通过铜离子或锌离子固相化金属层析柱纯化；
● 抗GFP的抗体也被用于GFP融合蛋白的检测，在GFP的荧光能力被破坏的情况下(如SDS-PAGE)

6. 细菌flag蛋白纯化用什么菌株和载体

3，重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液，若转化DH5α。当需要表达蛋白时。750μl20mMTris-HCl，Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消化完全后，克隆进T-载体，需进行包涵体纯化、定量分析确定目的蛋白⑥放大试验纯化目的蛋白 放大试验，介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达，然后用与消化载体相同的内切酶进行消化和胶回收，阳性菌落数远大于阴性菌落。然后1,pH7。1，然后上样进行SDS-PAGE分析.总结(注意事项)(1)所有操作尽量在冰上操作通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。(6)37℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体。(4)长期保存的pET重组子在高浓度甘油(19%)中会导致质粒不稳定，需要重新抽提质粒。筛选LB平板需含50μg/、将摇瓶置于冰上5min,除去上清重复洗涤，低温(15-20℃)延长诱导时间(过夜)可以使溶解性蛋白的产量达到最大。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上。(5)T7lac启动子是严谨启动子，受噬菌体T7强启动子控制、检测或纯化目的蛋白时提供方便。(4)若目标蛋白在不溶部分中，即没有移码.4-1、除去上清，保证读码框正确，切带按照胶回收试剂盒说明回收目标片段;μl 卡那霉素。(7)进行SDS-PAGE分析时。[6]DE3溶原菌的诱导表达(1)，并注意不同的表达载体上的融合标签和携带的抗性基因，其中有些标签是可以去除的，37℃培养至OD600为0.5重悬沉淀，参照其它试验手册，增加模板和引物的浓度。3)宿主菌的保存，从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程; 酶体积不要超过反应体系的10%)3μl 1mg/，在定位;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导.05U小牛碱性磷酸酶。85℃迅速加热3min使蛋白变性。(4).0)中.4mM(T7启动子)或1 mM(T7lac启动子)，制备粗提物。6)-20℃保存备用、培养基中加入100mMIPTG至终浓度为0.准备工作(试剂配置和器材准备)1)操作流程示意图主要步骤操作①制备pET-32a(+)载体 用限制性酶消化，既可转化BL21也可转化DH5α。一般先用PCR扩增带酶切位点的目标基因、质粒抽提及酶切分析，离心，尽量减少PCR循环次数。但在PCR过程中，IPTG诱导时可以优化最佳浓度(25uM-1mM之间)使目的蛋白达到最佳的活性和溶解性。4)感受态细胞的制备。[7]SDS-PAGE进行目标蛋白质分析(1)，5000g 4℃离心5min收集菌体。2、从新鲜的划线平板中挑取单克隆到50ml含50μg/。[3]在pET32a载体中插入片段连接反应2μl 10×连接buffer2-5μl 50ng/μl 预制的pET32a载体1μl T4连接酶5-7μl 预制目标基因插入片段加水到20μl，包括PCR，37℃ 30min5)全部样品在1%琼脂糖胶上电泳。以pET-32a(+)为例。(3)构建好的载体最好进行测序验证。(3)，再转化BL21。(3)100μl可溶上清中加入100μl 4×SDS上样buffer和水。[5]pET重组子鉴定如果亚克隆成功;μl 卡那霉素的液体培养基中。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列。[2]制备插入片段限制性消化和胶纯化是制备插入片段的常规方法，观察蛋白表达，以避免蛋白质发生变性，枪头混匀，再回收③插入片段克隆到pET-32a(+)载体 插入片段与pET连接，继续培养2-3小时、裂解液14000g离心10min，可采用高保真酶.25倍体积预冷的20mMTris-HCl (pH8。(5)，转化④转化表达宿主菌BL21 转化带有T7RNA聚合酶基因的菌株⑤诱导表达目的蛋白 SDS-PAGE,50μg/.操作步骤[1] 制备载体1)载体消化和胶纯化3μg pET载体3μl 10×限制性内切酶buffer10-20U 两种酶(是否共用buffer。(2)、机械破碎细胞、重悬细胞于0.5ml 1%SDS上样buffer中重悬沉淀，去磷酸化后胶纯化回收②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性消化，切除融合标签2)配制生长培养基如LB;(2)根据自己的需要选择不同的表达载体。在某些情况下，亲和纯化，菌体保存于-70℃或继续纯化。(2)，需要减少突变的发生，和100mM IPTG，分离可溶和不溶部分，16℃反应2h-过夜[4]转化转化方法同T-载体转化大肠杆菌DH5α一样，而30℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。长期存放菌株和pET重组子应保存于甘油中，需优化电泳上样体积，离心10000g5min、测序。一般用弗氏压碎法或超声波处理，体外转录和翻译。检验转化子的方法很多，加入0

7. MATLAB亲和数怎么编程

N=5000; %100000要算好长时间。这个算法没有改进过。
flag=zeros(N,1);
sumfac=zeros(N,1);
for n=1:N
if (flag(n)==0) %还没有计算过n的真因子和
n1=1;
for i=2:n-1
if mod(n,i)==0
n1=n1+i;
if n1>N
break;
end
end
end
flag(n)=1;
sumfac(n)=n1;

if (n1>N)
continue;
end

if (flag(n1)==0 )
n2=1;
for i=2:n1-1
if mod(n1,i)==0
n2=n2+i;
end
end
flag(n1)=1;
sumfac(n1)=n2;
else
n2=sumfac(n1);
end

if (n==n2)
disp([n,n1])
end
end
end

8. 程序之间的亲和性的理解。

一．ISO9000：94版标准存在的问题：

主要是生产硬件企业；针对规模较大的组织；三种质量保证模式，有一定的局限性；20项质量体系要素，要素间的相关性不好；17项程序文件限制了改进的机会；过多地强调了质量体系的符合性；缺少对顾客满意或不满意信息的监视；标准没有建立ISO9001与ISO9004的联系；标准没有考虑与其他管理体系的相容性；标准的通用性差，数量太多，应用的很少。

二．2000版标准的优点

1、面向所有组织，通用性强；2、文字通俗易懂，结构简明；3、建立八项原则，统一理念；4、鼓励过程方法，操作性强；5、强化最高管理者的领导作用；6、突出顾客满意和持续改进；7、考虑所有相关方的利益；8、增强与环境管理等其他管理体系的兼容性

三．(一)标准的目的

ISO9001:2000标准的目的在于明确保证产品的质量而使顾客满意所必需的质量管理体系最低要求。

1.为各类型组织建立质量管理体系提供一个基础性要求。组织达到了本标准的这一基本要求，也就说明它具备了稳定地提供符合规定要求的产品以及使顾客满意的能力。

2.为质量管理体系的评价提供了基准，也就是外部依本标准对组织的能力进行评定，组织也可依此对外部提供质量保证。

(二)标准的范围

从本标准的范围看，质量管理体系所规定的要求是一种通用要求，对于各种类型，不同规模和提供不同产品的组织都可适用。

(三)标准的用途

1.适用于组织内部自身的质量管理，检验满足组织自身要求的能力，并对组织内部的体系加以评价。 2.适用于组织外部，包括顾客和认证机构等对组织满足顾客和法律法规要求的能力的评定，其中包括了第二方认定或注册以及第三方认证。 3.本标准也可为相关的法规所引用时提供必要的参考。

四．质量管理体系

质量管理体系是指建立质量方针和质量目标并实现这些目标的体系。

述定义可以从以下几个方面来理解：

(1)体系是指相互关联或相互作用的一组要素。

(2)建立质量管理体系是为了有效地实现组织规定的质量方针和质量目标。

(3)组织建立质量管理体系不仅要满足在经营中顾客对组织质量管理体系的要求，预防不合格品发生和提供使顾客与其他相关方满意的产品，而且还应该站在更高层次上追求组织优秀的业绩来保持和不断改进、完善质量管理体系。

五、质量管理体系要求与产品要求的区别

产品要求是制订产品和过程规范、验证和改进产品过程的技术质量依据。

ISO9001质量管理体系要求并不规定产品要求，而是根据产品要求的目标，明确管理职责，加强资源管理，对产品实现过程进行控制，通过测量、分析和改进，确保持续稳定地提供符合规定要求的产品。

本条款首先申明ISO9000族标准区分了质量管理体系要求和产品要求。

ISO9000所规定的质量管理体系要求是对产品要求的补充，不是替代。

结合了产品要求的质量管理体系，才是一个组织的特定的质量管理体系。

六、质量管理体系的过程方法

1.过程的概念：过程是指将一组将输入转化为输出的相互关联或相互作用的活动。

2.过程的四大要素：输入、输出、活动和资源

一个组织要生产出能够满足顾客要求并使顾客满意的产品，就必须系统地识别各个必需的过程，特别是相互关联的过程和过程之间的接口，对这些过程切实加强组织和管理工作。这就是所谓的“过程方法”。

七．五、建立质量方针、质量目标的目的和意义

组织按照正确的途径建立质量方针和质量目标，对实现持续改进，减少质量损失，降低质量成本，有效、高效地实现产品和过程质量并取得良好的经济效益都会产生积极的影响。同时，组织通过制定和颁发质量方针与质量目标使顾客及其他相关方对本组织建立起充分的信心和信任感。

八．最高管理者在质量管理体系中的作用

1.制定组织的质量方针和质量目标2.贯彻以顾客为中心的原则3.贯彻过程方法的原则

4.遵循管理的系统方法的原则5.确保提供质量管理体系运行中所需的各种资源6.监视质量管理体系的运行7.决定实现质量方针和质量目标的有关措施8.按照持续改进的原则，决定实施改进的措施

一．审核准则、审核证据、审核发现、审核结论定义间的关系；

（1）审核证据：与审核准则有关的并且能够证实的记录、事实陈述或其它信息。质量管理体系的审核证据来源于质量记录、文件、现场观察以及询问等多种信息源。（2）审核发现：将收集到的审核证据对照审核准则进行评价的结果。审核发现与审核证据有关联关系，都与审核准则有关；对评价过程来讲，审核证据是输入，审核发现是输出。（3）审核结论：审核组考虑了审核目标和所有审核发现后得出的最终审核结果。审核结论与审核发现的关系是，审核发现是输入，审核结论是输出。

审核是一个过程，也是把输入转化为输出的活动

二．5.1头脑风暴法

（1）头脑风暴法的概念

头脑风暴法又叫畅谈法、集思法。它是采用会议的方式,引导每个参加会议的人围绕某个中心议题(如质量问题),广开言路,激发灵感,在自己的头脑中掀起风暴,毫无顾忌、畅所欲言地发表独立见解的一种创造性思维方法。

（2）头脑风暴法的用途

头脑风暴法在质量改进活动中的用途很广,可以用来识别存在的质量问题并寻求解决办法,还可用来识别质量改进的潜在机会。

三．亲和图法

（1）亲和图的概念

亲和图是针对某一问题,充分收集各种经验、知识、想法和意见等语言、文字资料,通过汇总,并按其相互亲和性,归纳整理这些资料,使问题明确起来,求得统一认识和协调工作,以利于问题解决的一种方法。

亲和图常用于归纳整理由头脑风暴法所产生的意见、观点和想法等语言资料，因此在质量保证和质量改进活动中经常用到。

（2）亲和图的主要用途：归纳思想,形成构思；认识事物；打破现状,提出新的方针;；筹划组织工作；彻底地贯彻方针。

四．水平对比法

水平对比法是指组织将自己的产品服务的过程和性能与公认的领先对手比较,识别组织自身存在的质量改进机会的方法。这是组织为了进行改进,与一些认定为最佳作业典范的组织相比较,然后以持续的、系统化的过程,评估自己的产品、服务和工作流程。

使用水平对比法,有助于组织认清目标和确定计划编制的优先顺序,使自己在市场竞争中处于有利地位。

五．流程图就是将一个过程（如工艺过程、检验过程、质量改进过程等）的步骤用图的形式表示出来的一种图示技术。通过一个过程中各步骤之间关系的研究，一般能发现故障的潜在原因，知道哪些环节需要进行质量改进。流程图可以用于从材料流向产品销售和售后服务的全过程的所有方面。流程图可以用来描述现有的过程，亦可用来设计一个新的过程。

六．树图

1．基本原理

树图又叫系统图。树图能将事物或现象分解成树枝状，树图就是把要实现的目的与需要采取的措施或手段，系统地展开，并绘制成图，以明确问题的重点，寻找最佳手段或措施。

在决策过程中，为了达到某种目的，就需要选择和考虑某一种手段；而为了采取这一手段，又需要考虑它下一级的相应手段，参见下图。这样，上一级手段成为下一级手段的行动目的。如此把要达到的目的和所需的手段按顺序层层展开，直到可以采取措施为止，并绘制成树图，就能对问题有一个全貌的认识，然后从图形中找出问题的重点，提出实现预定目标的最理想途径。

七．树图和因果图的关系

树图亦是一种倒立树状逻辑因果关系图。树图可以系统地把某个质量问题分解成许多组成要素，以显示出问题与要素、要素与要素之间的逻辑关系和顺序关系。比如，可以把头脑风暴法产生的意见、观点以及把用因果图法和亲和图法形成的见解等转换成树图，以便更清晰地显示出诸要素、要素同主题之间的逻辑关系、顺序关系或因果关系。树图一般是单目标的，但也可以是多目标的。

树图一般有侧向型和宝塔型两种

八．树图的主要用途

（1）目标、方针、实施事项的展开； （2）明确部门职能、管理职能； （3）制定质量保证计划，对质量保证活动进行展开； （4）新产品研制过程中设计质量的展开； （5）对解决企业有关质量、成本、交货期等问题的创意进行 （6）与因果图结合使用。

一．分层法

概念

分层法又称分类法，即：把收集来的原始质量数据，按照一定的目的和要求加以分类整理，以便分析质量问题及其影响因素的一种方法。

原则：根据分层的目的进行； 按照一定的标志； 按相同性质、相同条件数据的归类； 同层波动小，层间差别大是分层的关键

二．因果分析图法—概念

也叫特性因素图/鱼刺图/石川图，是整理和分析影响质量（结果）的各因素之间的一种工具。

形象地表示了探讨问题的思维过程，通过有条理地逐层分析，可以清楚地看出“原因-结果”“手段-目标”的关系，使问题的脉络完全显示出来。

绘制因果分析图最一般的方法是“大枝展开法”，这种方法是从大枝到中枝、从中枝到小枝，按此次序提出各种要因，这样往往可以将各种因素限制在预先确定的框框内，容易形成小而整齐的因果图。

三．调查表法—概念

调查表法是利用统计表来进行数据整理和粗略原因分析的一种方法，也叫检查表法或统计分析表法。

统计分析表是最为基本的质量原因分析方法，也是最为常用的方法。在实际工作中，经常把统计分析表和分层法结合起来使用，这样可以把可能影响质量的原因调查得更为清楚。需要注意的是，统计分析表必须针对具体的产品，设计出专用的调查表进行调查和分析。

四．直方图（histogram）法—概念

从总体中随机抽取样本，将从样本中获得的数据进行整理，从而找出数据变化的规律，以便测量工序质量的好坏

局限性：尽管直方图能够很好地反映出产品质量的分布特征，但由于统计数据是样本的频数分布，它不能反映产品随时间的过程特性变化，有时生产过程已有趋向性变化，而直方图却属正常型，这也是直方图的局限性。

五．散布图法—概念

散布图(相关图)是通过分析研究两种因素的数据的关系，来控制影响产品质量的相关因素的一种有效方法。相关关系一般可为：原因与结果的关系；结果与结果的关系；原因与原因的关系。

散布图法用途

用相关图法，可以应用相关系数、回归分析等进行定量的分析处理，确定各种因素对产品质量影响程度的大小。如果两个数据之间的相关度很大，那么可以通过对一个变量的控制来间接控制另外一个变量。

相关图的分析，可以帮助我们肯定或者是否定关于两个变量之间可能关系的假设。

一、服务质量体系的概念

任何一个服务企业要实现自己的质量战略即优质服务战略，没有完善的服务质量体系作保证，都将仅仅成为空洞的口号。

服务质量体系就是为实施服务质量管理所需的组织结构、程序、过程和资源。

理解该含义应注意的三个方面。

二、服务的特征

(一)服务或多或少都具有无形性

无形性是服务的最主要特征。(二)服务的生产和消费不可分离(三)服务并非实物，是一系列的活动或过程(四)服务一般具有差异性服务质量的检验较难采用统一的标准。(五)服务一般具有不可储存性(六)服务是不包括服务所有权转让的特殊形式的交易活动服务在交易完成以后就消失了，顾客并没有实质性地拥有服务。

三．服务质量的内容

从顾客的角度来说，顾客购买服务并进行消费，对服务质量的认识可以归纳为两个方面：

一方面是顾客通过消费服务究竟得到了什么，即服务的结果，通常称之为服务的技术质量；

另—方面是顾客是如何消费服务的，即服务的过程，通常称之为服务的功能质量。

服务质量既是服务的技术质量和功能质量的统一，也是服务的过程和结果的统一。

技术质量是客观存在的，而功能质量则是主观的，是顾客对过程的主观感觉和认识。顾客评价服务质量的好坏，是根据顾客所获得的服务效果和所经历的服务感受，两者综合在一起才形成完整的感受。

四．1.服务质量的来源

古默森的理论叫4Q模式，即质量的形成有四个来源：设计来源、生产来源、供给来源和关系来源。

这里根据服务的生产和消费不可分离的特征，将服务质量的来源综合为：（1）设计来源（2）供给来源（3）关系来源

1、 质量管理专家的相关思想和理论

2、 质量管理的发展历程：

质量检验阶段（操作者工长检验员的质量管理）

统计质量管理阶段。休哈特提出了控制好预防缺陷的概念，并发明了控制体，把数理统计方法引入到质量管理中；道奇和罗米格提出了抽样检查法，它既能保证一定的质量要求，又能大大的减少啊检验工作量。

现代质量管理阶段。朱兰认为，保护消费者权利运动是质量管理学在理论和实践放米娜的重大发展推动力；菲根堡姆出版《全面质量控制》一书，强调执行质量只能是公司全体人员的责任，即全面质量管理概念。

3、 全面质量管理的基本要求

三全一多：全员的质量管理、全过程的质量管理、全企业的质量管理、多方法的质量管理。

4、 ISO9000核心标准

ISO9000：2000《质量管理体系——基础和术语》

ISO9001：2000《质量管理体系——要求》

ISO9004：2000《质量管理体系——业绩改进指南》

ISO19011《质量和环境管理体系审核指南》

5、 质量管理基础工作：标准化工作、计量工作、质量信息工作、质量责任制和质量教育工作

6、 质量成本的构成

内部运行质量成本：预防成本、鉴定成本、内部损失成本、外部损失成本

外部质量保证成本

7、 术语•产品：硬件、流程性材料、软件、服务

8、 质量管理原则：以顾客为中心、领导作用、全员参与、管理的系统方法、过程方法、基于事实的决策方法、持续改进、互利的供方关系

9、 过程方法的四个模块：资源管理，管理职责，测量、分析和改进，产品实现

10、 ISO9000/1/4的联系与区别

与ISO9000的关系

ISO9000所属的质量管理基本原则、术语定义和质量管理体系的基本原理，是理解和掌握本标准的基础。

与ISO9004的关系

ISO9001和ISO9004是互相成对的协调一致质量管理体系标准，两项标准可以一起使用，也可以单独使用。ISO9004和ISO9001质量管理体系要求的基础上，扩展了描述质量管理体系应包括的过程。必须注意，ISO9004不是事实ISO9001的指南，而是为希望超过ISO9001所述的最低要求的组织提供了指南。量小标准的具体关系见图。

比较标志 ISO9001 ISO9004

相同点 1 标准属性 质量管理体系标准

2 标准结构 总体结构与其他管理体系标准相似，均互相相容

3 适用范围 适用于所有组织和产品

不同点 4 标准目的 为产品质量达到规定要求，使顾客满意，明确对质量管理体系的最低要求 为改进组织整体业绩，使各相关方满意，提供质量管理体系的应用指南

5 内容范围 阐述质量管理体系必须在产品质量保证和顾客满意两方面达到的最低要求，通过符合这些要求证实具有提供满足顾客要求和适用法律、法规要求的产品的能力 超越ISO9001的内容，阐述了综合性质量管理体系，描述了体系应含的过程，指引组织持续改进内部过程，且提高效率和有效性

6 应用领域 组织内部管理、合同目的和认证等 组织内部管理

7 采用方法 旨在采用全部内容，在特定情况下，有条件地允许剪裁制定章节范围的要求 无条件约束，组织自定，酌情采用标准的内容

11、 管理评审与内部审核的关系

12、 内部审核的范围：要素、场所、活动；一般顺序：去定任务、审核准备、现场审核、编写审核报告、纠正措施的跟踪及汇总分析。

13、 质量改进的工具：头脑风暴法、亲和图法、水平对比法、流程图、数图、分层法 、排列图法 、因果分析图法 、调查表法 、直方图法 、散布图法 、控制图法

14、 质量改进的运行方式：PDCA循环，即计划、执行、检查、总结

15、 质量检验的含义和任务：ISO9001：2000中指出，检验是“通过观察和判断，必要时结合测量、试验所进行的符合性评价”；检验包括以下几个步骤：度量、比较、判断、处理

16、 检验的质量职能：鉴别职能、保证职能、报告职能、预防职能、改进职能。

17、 质量检验的方式

(一)按检验的数量特征划分为全数检验和抽样检验

(二)按检验的质量特性值的特征划分为计数检验和计量检验

(三)按检验方法的特征划分为理化检验和感官检险

(四)按检验对象检验后的状态特征划分为破坏性检验和非破坏性检验

(五)按检验实施的位置特征划分为固定检验和流动检验

(六)按检验目的的特征划分为验收检验和监控检验

18、 质量检验的基本类型: 进货检验、工序检验和完工检验

（一）进货检验

1.首件（批）样品检验；2.成批进货检验（1）分类检验法，（2）抽样检验

（二）工序检验

1.首件检验。 2.巡回检验。 3.末件检验。

（三）完工检验

完工检验可能需要模拟产品用户的使用条件和运行方式。

可以是全数检验，也可以是抽样检验，应该视产品特点及工序检验情况而定。

19、 设置检验机构通常应遵循如下原则：

(1)检验机构应设置在质量把关的关键环节；

(2)检验机构应能满足生产流程的需要；

(3)检验机构应有合适的空间和环境；

(4)检验机构的设置应考虑节约检验成本。

20、 三检制（检验制度）：三检制就是操作者自检、工人之间互检和专职检验人员专检相结合的一种检验制度。

21、 服务质量：就是服务固有的特性满足顾客和其他相关方要求的能力。

22、 服务质量环：是对服务质量形成的流程和规律的描述（如下图），其中三个最基本的过程就是市场开发、设计和服务提供。

23、 服务质量的内容：从顾客的角度来说，顾客购买服务并进行消费，对服务质量的认识可以归纳为两个方面： 一方面是顾客通过消费服务究竟得到了什么，即服务的结果，通常称之为服务的技术质量；另—方面是顾客是如何消费服务的，即服务的过程，通常称之为服务的功能质量。服务质量既是服务的技术质量和功能质量的统一，也是服务的过程和结果的统一。技术质量是客观存在的，而功能质量则是主观的，是顾客对过程的主观感觉和认识。顾客评价服务质量的好坏，是根据顾客所获得的服务效果和所经历的服务感受，两者综合在一起才形成完整的感受。

24、 服务质量的来源：设计来源、供给来源、关系来源、技术质量、功能质量

25、 建立服务质量体系的要点：服务质量体系主要有管理者的职责、自愿、质量体系结构三个关键方面，而顾客则是服务质量体系三个关键方面的核心。只有当管理者的职责、人力和物质资源以及质量体系结构三者之间相互配合和协调时，才能保证顾客满意。

26、 认证制度的类型：型式试验、型式试验加市场抽样检验、型式试验加工厂抽样检验、型式试验加认证后监督（市场和工厂抽样检验）、型式试验加工厂质量体系评定加认证后监督（质量体系复查、市场和工厂抽样检验）、工厂质量体系评定、披肩、百分之百检验

9. flag tag是什么

Flag标签蛋白

Flag标签蛋白为编码8个氨基酸的亲水性多肽（DYKDDDDK），同时载体中构建的Kozak序列使得带有FLAG的融合蛋白在真核表达系统中表达效率更高。 FLAG作为标签蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：

FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。
融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。
FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。
融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。

一个什么公司的产品介绍里的 找不着链接了就不贴引用了

说白了就是做表达出来的蛋白的一个标签

10. Android面试题-程序之间的亲和性的理解, 该怎么回答哦

可以如下回答：
1、默认情况下一个应用的所有Activity都是具有相同的affinity，都是从application中继承，application的affinity默认就是manifest的包名。
2、affinity对Activity来说，就像是身份证一样，可以告诉所在的Task，自己属于其中的一员。
3、应用场合：
a:根据affinity重新为Activity选择合适的宿主Task;
b:与allowTaskReparenting属性配合;
c:启动Activity使用Intent设置了FLAG_ACTIVITY_NEW_TASK标记。