proteing琼脂糖树脂

❶ protein g agarose / salmon sperm dna 可用于免疫沉淀吗

免疫共沉淀相互作用
目蛋白结合Fc蛋白Fc蛋白结合Protein AProtein A结合琼脂糖基质
SEPHAROSEAGAROSE都琼脂糖属于同公司同类型同名称
所理论都用
建议多看看书
别人的只能参考

❷ 低熔点琼脂糖凝胶怎么配制

你好，琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作，因此正确地操作对整个实验来讲很有必要，大体流程如下：称量、熔胶、倒胶、拔梳。
1.称量
我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数，即所称取的琼脂糖粉的质量（g）比所加的tbe缓冲液的体积（ml）即胶的浓度。缓冲液的体积根据胶板的大小而定。如小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104g，tbe13ml。
2.熔胶
将所称量的琼脂粉与tbe在锥形瓶中混合，在微波炉内反复加热2~3次至琼脂粉溶解并无气泡。
3.倒胶
干净的胶槽内摆好梳子，往胶内滴加1ul左右核酸染料，混匀，待冷却至不烫手，轻轻倒入胶板内。
4.拔梳.待大约20min后，轻轻拔掉梳子（若不好拔，可以滴加适量的tbe缓冲液）。

❸ 琼脂糖凝胶电泳时，琼脂糖的浓度为2%,胶不凝是怎么回事啊还要继续增大琼脂糖的浓度吗

一般来说1%的浓度就够了，如果你的样品分子量比较大，可以用2%的，浓度越大，胶越硬。你做的胶不能拿，用的是TBE缓冲液吗？配完后，需要加热至沸腾，然后再冷却。 还有，你用的是琼脂粉还是琼脂糖？做胶用琼脂糖，配培养基用琼脂粉。

❹ 免疫磁珠和琼脂糖珠进行免疫共沉淀的区别

免疫磁珠和琼脂糖珠进行免疫共沉淀的区别
（1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C， 最大转速离心30 min后取上清；
（2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；
（3）取10μl protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3 次，每次3,000 rpm离心3 min；
（4）将预处理过的10μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与protein A琼脂糖珠耦联；
（5）免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 rpm 速度离心3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3－4次；最后加入15μl的2×SDS 上样缓冲液，沸水煮5分钟；
（6）SDS-PAGE, Western blotting或质谱仪分析。
注意的问题：
（1）细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2%SDS)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的cocktailer。
（2）使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用。
（3）使用对照抗体：

❺ 免疫共沉淀，就是IP，中用的琼脂糖珠是什么东西，比如说我要做A蛋白的相关蛋白，

IP是研究两个蛋白或者一个片段和一个蛋白之间有没有相互作用的 pull down是研究是否存在该蛋白的 至于前面的问题我还不太确定 应该是作为固相载体分离蛋白的

❻ 琼脂糖凝胶怎么配制

把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，倒入玻璃杯中，冷却制成的凝胶。融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。即完成琼脂糖凝胶的配置。

制成的小颗粒用于凝胶过滤，适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶，也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。

(6)proteing琼脂糖树脂扩展阅读：

琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。

琼脂由琼脂糖和琼脂果胶两部分组成：

作为胶凝剂的琼脂糖是不含硫酸酯的非离子型多糖，是形成凝胶的组分，其大分子链链节着1，3苷键交替相连的β-D-半乳糖残基和3,6-内醚-L-半乳糖残基 。而琼脂果胶是非凝胶部分，是带有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖，也是商业提取中力图去掉的部分。

商品琼脂一般带有2%～7%的硫酸酯，0%～3%的丙酮酸醛及1%～3%的甲乙基。在工业上的琼脂 色泽由白到微黄，具有胶质感，无气味或有轻微的特征性气味，琼脂不溶于冷水，易溶于沸水。

琼脂系选用优质天然石花菜、江蓠菜、紫菜等海藻为原料，采用科学方法精炼提纯的天然高分子多糖物质。

琼脂为亲水性胶体，分有条状和粉末状，不溶于冷水，易溶于热水。琼脂在工业上具有独特的重要性，琼脂的浓度即使低至1%仍能形成相当稳定的凝胶，是食品工业、化学工业、医学科研所必需之原料。

❼ 请问高手，免疫共沉淀中protein A 琼脂糖珠的作用原理谢谢

prorein
A或者
Protein
G能特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段，所以能和抗体结合，抗体和你的目标蛋白结合，目标蛋白和相互作用的蛋白结合。

❽ 请问高手，免疫共沉淀中protein A 琼脂糖珠的作用原理谢谢

protein A 可以特异性的和IgG结合。

❾ 免疫共沉淀中proteinA/G的工作原理Western blot中封闭原理

我说下个人理解，我认为加入ProteinA/G是一方面与抗体结合，另一部位与琼脂糖珠子结合，便于后续分离，至于问题2我就不清楚了

❿ protein g与fc哪一段结合

hi-trap是柱子的型号
protein G是填料的名字，是来自G链球菌组的细胞表面蛋白偶联在琼脂糖基质上。protein G通过非免疫机制结合抗体的Fc区域。protein G可以特异性的结合IgG的Fc区域，但是对于一些多克隆抗体IgGs对人源的IgG抗体能够有更强的结合。