① 这个碱性磷酸酶底物显色试剂盒(BCIP/NBT)哪个厂家的好
我看选择博凌科为的碱性磷酸酶底物显色试剂盒(BCIP/NBT)的多啊
操作方法:
1、按常 规操作 ,将蛋 白样品 进行 SDS-PAGE电泳, 转膜(硝酸 纤维素膜 和 PVDF 膜 均
可使用)。封闭 30~120 min,一抗孵育 1 小时或过 夜;漂洗 3~5 次,碱 性磷酸酶标 记二抗孵 育 30~120 min,漂洗 3~5 次。如 上述步骤 采用磷酸缓 冲液,需 换用 Tris 缓 冲液漂洗 3~5 次以完全去除磷酸成分对于 AP抑制作用。
2、取 1ml AP reaction Buffer 中 加 10μl NBT溶液和 10μl BCIP 溶液,混匀。注意:根据膜的大 小,AP Buffer、NBT、AP Buffer NBTBCIP 的量等比例扩大。
3、把经 洗涤的 PVDF/NC 膜浸入显 色底物 混合物中,于室温平缓摇动进行温育。
⒋细心观察反 应过程, 待蛋白膜上 条带呈色明显,而无明显背景时(一般约 5-15 分钟),把膜浸入水中漂洗停止反应。
注意:若信号太弱可增加反应时间。
5、拍摄膜照片 或直接保 存膜留作永 久试验纪录。
② 常用显色剂有哪些
TLC
显色试剂的选择
显色剂可以分成两大类:
一类是检查一般有机化合物的通用显色
剂;另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。
通用显色剂
硫酸
常用的有四种溶液:硫酸
-
水
(1:1)
溶液;硫酸
-
甲醇或乙醇
(1:1)
溶液;
1.5mol/L
硫酸溶液与
0.5-1.5mol/L
硫酸铵溶液,喷后
110
℃烤
15min
,不同有机
化合物显不同颜色。
0.5
%碘的氯仿溶液
对很多化合物显黄棕色。
中性
0.05
%高锰酸钾溶液
易还原性化合物在淡红背景上显黄色。
碱性高锰酸钾试剂
还原性化合物在淡红色背景上显黄色。
溶液
I
:
1%
高锰酸钾溶液;
溶液
II
:
5%
碳酸钠溶液;
溶液
I
和溶液
II
等量混合应用。
酸性高锰酸钾试剂
喷
1.6%
高锰酸钾浓硫酸溶液
(
溶解时注意防止爆炸
)
,喷
后薄层于
180
o
C
加热
15
~
20min
。
酸性重铬酸钾试剂
喷
5%
重铬酸钾浓硫酸溶液,必要时
150
o
C
烤薄层。
5%
磷钼酸乙醇溶液喷后
120
o
C
烘烤,
还原性化合物显蓝色,
再用氨气薰,
则背景变
为无色。
专属性显色剂
由于化合物种类繁多,
因此专属性显色剂也是很多的,
现将在各类化合物中
最常用的显色剂列举如下:
(1)
烃类
①硝酸银
/
过氧化氢
检出物:卤代烃类
溶液:硝酸银
0.1g
溶于水
1ml
,加
2-
苯氧基乙醇
l00ml
,用丙酮稀释至
200ml
,
再加
30%
过氧化氢
1
滴。
方法:喷后置未过滤的紫外光下照射;
结果:斑点呈暗黑色。
②荧光素
/
溴
检出物:不饱和烃
溶液:
I
.荧光素
0.1g
溶于乙醇
100ml
;
II
.
5%
溴的四氯化碳溶液。
方法:先喷
(I)
,然后置含溴蒸气容器内,荧光素转变为四溴荧光素
(
曙红
)
,荧光
消失,
不饱和烃斑点由于溴的加成,
阻止生成曙红而保留荧光,
多数不饱和烃在
粉红色背景上呈黄色。
③四氯邻苯二甲酸酐
检出物:芳香烃
溶液:
2
%四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯
(10:1)
的溶液。
方法:喷后置紫外光下观察。
④甲醛
/
硫酸
检出物:多环芳烃
溶液:
37%
甲醛溶液
0.2ml
溶于浓硫酸
l0ml
。
(2)
醇类
3,5-
二硝基苯酰氯
检出物:醇类
溶液:
I
.
2%
本品甲苯溶液;
II
.
0.5%
氢氧化钠溶液;
III
.
0.002%
罗丹明溶液。
方
法:先喷
(I)
,在空气中干燥过夜,用蒸气薰
2min
,将纸或薄层通过试液
(II)30s
,
喷水洗,趁湿通过
(III)15s
,空气干燥,紫外灯下观察。
硝酸铈铵
检出物:醇类
溶液:
I
.
1%
硝酸铈铵的
0.2mol/L
硝酸溶液;
II
.
N,N-
二甲基
-
对苯二胺盐酸盐
1.5g
溶于甲醇、
水与乙酸
(128ml+25ml+1.5ml)
混合液中,
用前将
(I)
与
(II)
等量混合。
喷板后于
105
o
C
加热
5min
。
③ 酯类物质如何显色,显色剂用什么
需要有显色基团才行。。
④ 染发用的显色剂每个牌子都是一样的吗
这种肯定是不一样的呀,因为每个牌子里面的一些成分是不一样的,但是最后呈现出来的效果都是一样的。
⑤ 如何解决使用水杨酸锌树脂显色剂时喷墨墨水扩散
由于无碳复写来纸涂料黏附自在原纸表面,原纸出现的局部单根纤维和颜料粒子脱落(原纸掉毛),就会导致涂料层出现局部脱落。 根据生产实践,分析产生掉毛掉粉的原因只要有:原纸的质量、涂料层胶黏剂的用量不足、粉状显色剂用量多、颜料分散不均匀且涂料中含有杂质、涂布加工过程中的干燥温度曲线控制不当从而影响涂层强度、压光压力不足导致纸平滑度低、印刷速度的提高及使用黏度大的油墨也会加大纸张的掉毛掉粉。依据掉毛掉粉的原因不同,采用如下措施加以解决。
一、生产无碳复写纸时,选择表面强度高的原纸 实践证明,进口或国内优质原纸的表面强度明显优于国产低档原纸,但由于进口或国内优质原纸价格较高,造成加工成本高。对表面强度相对较差的国产低档原纸,可采取调节胶黏剂用量的方法来提高涂布纸的表面强度。
二、生产无碳复写纸时适当调节途布中胶黏剂的用量 胶黏剂的用量和种类直接影响涂布纸的表面强度,如果掉粉只是涂料层从纸表面脱落,可以通过增加涂料中胶黏剂的用量来消除。