污水中分离噬菌体实验

㈠ 离心法分离噬菌体和细菌会导致死亡么，为什么

因为时间久了噬菌体在细菌体内大量繁殖到一定程度，细菌就会死亡裂解。而噬菌体便会从细菌中跑出，使分离后上清液含有噬菌体。因此具有放射性
而我们知道沉淀物是指细菌（因为它密度比较大），噬菌体密度较小。
因此脱离细菌后。经过分离便处于上清液中了

㈡ 噬菌体效价测定实验中所用操作方法和书上介绍的操作方法比较有什么优缺点

5 方法
5.1 噬菌体的检查
5.1.1 样品采集
将2～3g土样或5mL水样（如阴沟污水）放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌（大肠杆菌(Escherichia coli)）菌液3～5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。
5.1.2 增殖培养
30℃振荡培养12～18h, 使噬菌体增殖。
5.1.3 离心分离
将上述培养液以3000rpm离心15～20min, 取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2～10-3，用于噬菌体检查及效价测定。
5.1.4 生物测定法
5.1.4.1双层琼脂平板法
5.1.4.1.1 倒下层琼脂
融化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。
5.1.4.1.2倒上层琼脂
融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌(Escherichia coli)) 菌液0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。
5.1.4.1.3恒温培养
30℃恒温培养6～12h观察结果。
5.1.4.1.4 观察结果
如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑──????噬菌斑。
5.1.4.2 单层琼脂平板法
省略下层培养基，将上层培养基的琼脂量增加至2%，融化后冷却至45℃左右，如同上法加入指示菌和检样，混合后迅速倒平板。30℃恒温培养6～16h后观察结果。
5.1.5 离心分离加热法（快速检查）
取大肠杆菌(Escherichia coli)正常培养液和侵染有噬菌体的异常大肠杆菌(Escherichia coli)培养液，4000rpm离心20min，分别取两组发酵液的上清液(A1)，一部分于721分光光度计上测定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于试管中，置水浴中煮沸2min（A2），检测A2溶液OD650光密度值，记录结果。
5.2 噬菌体效价的测定
5.2.1 倒平板
将融化后冷却到45℃左右的下层肉膏蛋白胨固体培养基倾倒于11个无菌培养皿中，每皿约倾注10mL培养基，平放，待冷凝后在培养皿底部注明噬菌体稀释度。
5.2.2 稀释噬菌体
按10倍稀释法，吸取0.5mL大肠杆菌(Escherichia coli)噬菌体，注入一支装有4.5mL1%蛋白胨水的试管中，即稀释到10-1，依次稀释到10-6稀释度。
5.3 噬菌体与菌液混合
将11支灭菌空试管分别标记10-4、10-5、10-6和对照。分别从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取0.1mL于上述编号的无菌试管中，每个稀释度平行做三个管，在另外两支对照管中加0.1mL无菌水，并分别于各管中加入0.2mL大肠杆菌(Escherichia coli)菌悬液，振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀，置37℃水浴中保温5min，让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。
5.4.4 接种上层平板
将11支融化并保温于45℃的上层肉膏蛋白胨半固体琼脂培养基5mL分别加入到含有噬菌体和敏感菌液的混合管中，迅速搓匀，立即倒入相应编号的底层培养基平板表面，边倒入边摇动平板使其迅速地铺展表面。水平静置，凝固后置37℃培养。
5.5 观察并计数
观察平板中的噬菌斑，并将结果记录于实验报告表格内，选取每皿有30～300个噬菌斑的平板计算噬菌体效价。
计算公式： N=Y/V?X
（N：效价值，Y：平均噬菌斑数／皿，V：取样量，X：稀释度）
例如：当稀释度为10-6时，取样量为0.1 mL/皿，同一稀释度

㈢ 如图是噬菌体侵染细菌实验的部分步骤示意图，对此过程的有关叙述正确的是（）A．选用噬菌体作为实验

A、选用噬菌体作为实验材料的原因之一是其成分只有蛋白质和DNA，A正确；
B、噬菌体必须寄生在活菌中才能培养，所以被³⁵S标记的噬菌体是接种在用³⁵S的培养基培养的大肠杆菌中获得的，B错误；
C、实验中采用搅拌和离心等手段是为了把噬菌体的蛋白质外壳和菌体分离，C错误；
D、在新形成的噬菌体中没有检测到³⁵S，说明噬菌体的遗传物质是DNA，由于蛋白质没有进入菌体，没有观察到蛋白质的作用，不能说明蛋白质不是遗传物质，D错误．
故选：A．

㈣ 噬菌体侵染细菌实验悬浮液和沉淀的成分 原因

离心法离心之后，质量大的在下层，质量小的在上层。沉淀中是大肠杆菌，上层液体中是噬菌体。由于噬菌体的繁殖方式是将核酸注入宿主细胞，而将蛋白质外壳留在外面，所以在试验中，最理想的状态是上层中只有剩下来的蛋白质外壳。但由于某些原因（如时间过长，导致大肠杆菌裂解，释放出其中已经繁殖的噬菌体），上层可能出现含有核酸的噬菌体完整病毒。或者（如搅拌不充分，导致附着在大肠杆菌菌体表面的蛋白质外壳未能与大肠杆菌分离而一起沉淀），沉淀中也出现噬菌体蛋白质。

㈤ 就是哪个咯：噬菌体侵染细菌实验中，检测放射性物质上清下清都有是什么情况呢，，求原因，请分开说明S,P

沉淀物的放射性很低：“搅拌不充分，少部分噬菌体与细菌未分离”。 上清液里放射性很低：“保温时间过短，少数噬菌体未侵染”或者是“保温时间过长，细菌裂解”。

㈥ 噬菌体侵染细菌实验中采用搅拌离心等手段是为了把DNA和蛋白质分离。这句话对吗为什么

不对！
首先搅拌和离心是在噬菌体侵染大肠杆菌完成之后进行的工作,也就是说,现在的细菌表面有原来的噬菌体的蛋白质外壳,细菌内部,有新合成的噬菌体.然后,搅拌是为了让细菌和他表面的噬菌体蛋白质外壳分离,离心是为了让细菌沉到底部,而蛋白质外壳到上清液中,然后分别检测上清液和沉淀物的放射性.（如果S标记,则上清液有放射性；如果P标记,则沉淀物有放射性）
综上所述,搅拌和离心是为了把细菌和蛋白质外壳分离开来

㈦ 生物试题 噬菌体侵染细菌的实验中搅拌和离心的目的是什么

搅拌的目的是使吸附在细菌上的噬菌体与细菌分离.
离心的目的是让上清液中析出重量较轻的T2噬菌体颗粒,而离心管的沉淀物中留下被感染的大肠杆菌.

㈧ 高中生物噬菌体侵染细菌实验，离心为什么不能代替搅拌。直接离心不行吗

搅拌作用是让吸附在细菌上的噬菌体与大肠杆菌分离。
离心是为让上清液中析出重量较轻的噬菌体颗粒，而沉淀物中留下被感染的大肠杆菌。(即离心是为比重不同的物质分层)

㈨ 噬菌体浸染实验中，离心和搅拌的作用分别是什么上层是哪些物质（具体些），下层是哪些物质

如果只是搅拌而不离心，的确也能分开，但是需要的时间长，细菌会裂解。不知道你有没有注意到教科书上的原话，这个实验一定要在“短时间”保温后搅拌、离心让噬菌体和细菌分开。
搅拌和离心的目的是为了将噬菌体蛋白质外壳同侵入大肠杆菌的噬菌体DNA分开，以便对放射性元素跟踪测试。离心会使质量较轻的噬菌体颗粒进入上清液，而被感染的细菌则形成沉淀，但这必须保证是在菌体裂解之前进行。噬菌体侵染细菌的速度很快，在37度的条件下大约40分钟就可以产生100到300个子代噬菌体。从感染到释放前的这段时间叫潜伏期，大约经历20到30分钟。短时间的保温可获得足够数量的子代噬菌体，但又必须避免超出潜伏期（确保溶液分层），所以离心要在“短时间”保温后及时进行。

㈩ 噬菌体侵染细菌实验步骤

有四个步骤，分别是：

1、培养用p32和s35 标记的大肠杆菌，再用此大肠杆菌培养噬菌体。p32用于标记噬菌体蛋白质，s35 用于标记噬菌体DNA。

2、用培养后的p32和s35噬菌体侵染未被标记的的大肠杆菌。

3、培养物离心，分离。

4 、分别对上清液和沉淀物的放射性进行检测。上清液中有S35，而沉淀中几乎没有；沉淀中有P32而上清液中几乎没有。

Alfed Hershey和Martha Chase（1952）将宿主大肠杆菌细胞分别放在含放射性同位素35S或32P的培养基中，用35S标记蛋白质，32P标记蛋DNA。宿主细胞在生长过程中就被35S或32P标记上了。然后用T2噬菌体分别感染被35S或32P标记的细菌，并在这些细菌中复制增殖。

宿主菌裂解释放出很多子代噬菌体，这些子代噬菌体也被标记上35S或32P。然后用分别被35S，或32P标记的噬菌体去感染没有被放射性同位素标记的宿主菌，然后测定宿主菌细胞带有的同位素。被35S标记的噬菌体所感染的宿主菌细胞内很少有35S，而大多数35S出现在宿主菌细胞的外面。

也就是说，35S标记的噬菌体蛋白质外壳在感染宿主菌细胞后，并未进入宿主菌细胞内部而是留在细胞外面。被32P标记的噬菌体感染宿主菌细胞后，测定宿主菌的同位素，发现32P主要集中在宿主菌细胞内。所以噬菌体感染宿主菌细胞时进入细胞内的主要是DNA。

(10)污水中分离噬菌体实验扩展阅读

一、噬菌体核酸特点：

ss RNA：噬菌体中所含的核酸是单链RNA。

ds RNA：噬菌体中所含的核酸是双链RNA。

ss DNA：噬菌体中所含的核酸是单链DNA。

ds DNA：噬菌体中所含的核酸是双链DNA。

二、噬菌体繁殖特点

1、毒性噬菌体

指在宿主菌体内复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌。毒性噬菌体的增殖方式是复制，其增殖过程经历吸附穿入、生物合成和成熟释放3个阶段。

进入菌细胞内的噬菌体核酸首先经早期转录产生早期蛋白质，并复制子代核酸，再进行晚期转录产生噬菌体的结构蛋白。子代噬菌体达到一定数量时，由于噬菌体合成酶类的溶解，菌细胞突然裂解，释放出的噬菌体再感染其他敏感细菌。

2、温和噬菌体

感染宿主菌后并不增殖。其基因整合于细菌染色体上，即前噬菌体，随细菌染色体的复制而复制，并随细菌分裂而分配至子代细菌的染色体中。温和噬菌体有溶原性周期和溶菌性周期，可偶尔自发地或在某些理化或生物因素地影响下，整合的前噬菌体脱离宿主菌染色体，进入溶菌性周期导致细菌裂解，并产生新的成熟噬菌体。