1. DNA粗提取实验步骤
一 教学目的
1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
2.观察提取出来的DNA物质。
二 教学建议
在本实验的教学中，教师应注意以下几点。
1.实验材料必须准备充足。本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。如果不具备购买活鸡的条件,也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
2.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。
3.获取较纯净的DNA的关键步骤。
(1)充分搅拌鸡血细胞液DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
(2)沉淀DNA时必须用冷酒精实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h。
(3)正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动510 min。
三 参考资料
实验原理的补充介绍
1.DNA的释放 DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),于是释放出DNA,当然也有RNA。但是,释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起。
2.将DNA与蛋白质分离 根据二者的特性,即在浓度较高的氯化钠溶液(物质的量浓度为2 moL/L )中,核蛋白容易解聚,游离出DNA。而DNA在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na+与带负电的DNA结合成DNA钠盐。这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3.DNA的析出与获取 利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的浓度较高的氯化钠溶液中加入大量(300 mL )蒸馏水,稀释氯化钠溶液,使DNA的溶解度下降,而蛋白质的溶解度增高(这就是蛋白质的盐溶现象),从而使二者分离。这时,加上不停地搅拌,溶解度下降的DNA逐渐呈丝状物。再通过过滤,滤去蛋白质,就可以获取DNA的黏稠物了。如果采用离心法则更好,用4 000 r/min 的旋转频率,离心15 min ,除去上清液(含有蛋白质),留下的沉淀物中含DNA。
4.DNA的再溶解 再用较高浓度的氯化钠溶液去溶解DNA黏稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩 除去了蛋白质的核酸溶液,必须再进一步沉淀和浓缩。最常用的方法是酒精沉淀法。就是将含有Na+的DNA溶液,加入到相当于其两倍体积的体积分数为95%冷酒精溶液中,混匀以后可以使DNA沉淀、浓缩,形成含杂质较少的DNA丝状物,悬浮于溶液中。如果出现的丝状物较少,可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分。浓缩后的DNA丝状物,可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用)。
6.DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法(配方见下述的“药品配制”)。二苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而显现蓝色(溶液呈浅蓝色)。
鉴定时溶液蓝色的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
二苯胺试剂的配制
A液： 15 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液： 乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA粗提取与鉴定的另一种方法
1.材料用具
新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏斗,酒精灯,石棉网,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,二苯胺试剂,蒸馏水。
2.方法步骤
(1)DNA的粗提取
①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
研磨液的配制方法
Tris：10.1 g(相对分子质量为121.14),先加50 mL 蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2 moL/L 的盐酸调至pH8.0,再加下述药品。
NaCl：8.76 g(相对分子质量58.44)
EDTA：37.2 g(相对分子质量372.24)
SDS：20 g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1 000 mL。
若在室温低于20 ℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用。
研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离。
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
物质的量浓度为0.15 moL/L的氯化钠溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。
3.将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm处)。
2. DNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些
DNA的粗提取
①准备材料
将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24
h。
②取材
称取30
g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨
将碎菜花放入研钵中,倒入10
mL研磨液,充分研磨10
min
。
④过滤
在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1
000r/min的旋转频率,离心25
min,取上清液放入烧杯中)。在4
℃冰箱中放置几分后,再取上清液。
⑤加冷酒精
将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35
min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试剂
取0.1
mL
B液,滴入到10
mL
A液中,混匀。
②鉴定
取4
mL
DNA提取液放入试管中,加入4
mL
二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100
℃)加热10
min
。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
研磨液的配制方法
Tris：10.1
g(相对分子质量为121.14),先加50
mL
蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2
moL/L
的盐酸调至pH8.0,再加下述药品。
NaCl：8.76
g(相对分子质量58.44)
EDTA：37.2
g(相对分子质量372.24)
SDS：20
g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1
000
mL。
若在室温低于20
℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用。
研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离。
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
物质的量浓度为0.15
moL/L的氯化钠溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA的其他方法
用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。
3.将蜡纸放在紫外灯(260
nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280
nm处)。
3. 浓缩DNA方法有哪些(至少三种)
提取DNA的具体步骤
1.破碎细胞，释放DNA
鸡血细胞中的DNA与核蛋白结合，位于鸡血细胞的细胞核中，正常情况下是不会释放出来的。为了使DNA从细胞核中释放出来，需要向鸡血细胞液中加入蒸馏水，并且搅拌，从而使血细胞膜和核膜胀破。用玻璃棒搅拌可以加速细胞的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA。一般5～10 mL的鸡血细胞液加入20 mL蒸馏水搅拌5 min。释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起，应用3～4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质。
2．溶解细胞核内的DNA
在浓度较高的NaCl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNA溶解在溶液中。在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/L的NaCl溶液，搅拌1 min。注意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解。
3．DNA的析出
将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。教材中列举了提取DNA的三种方案，本案例选取方案一。加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使NaCl溶液的终浓度为0.1～0.2 mol/L。加水过程一般分三次进行，当总加水量为300 mL左右时，DNA已基本析出。加水太多、溶液过稀，会使DNA分子又重新溶解。
用3～4层纱布对DNA稀释液进行过滤，滤去蛋白质，收集DNA的黏稠物。如果采用离心法，效果更好。用4 000 r/min转速的离心机，离心15 min，除去上清液(含有蛋白质)，留下的沉淀物中含有DNA。此时注意观察DNA黏稠物的颜色。
4.DNA的初步纯化
如果提取的DNA量不够多且其中含有较多杂质，或者加入溶液和搅拌等操作过程不规范，都会导致实验现象不明显，常常使制取的DNA粗制品不能显示出DNA的本色──白色。为了增进实验效果，需要对DNA粗制品进行简单的提纯，下面的方案可供参考。
将DNA黏稠物再溶解，继续用2 mol/L的NaCl溶液20 mL溶解DNA黏稠物，仍旧沿一个方向不停搅拌3 min，使DNA充分溶解，以免损失。用3～4层纱布进行过滤（或离心），滤去杂质，收集含有DNA的滤液。向滤液中贴壁缓慢加入50 mL预冷的体积分数为95％的乙醇，并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌，溶液中会出现DNA丝状物。
实验一般要求采用预冷的95％的乙醇，但对比结果显示，常温下的乙醇溶液也可产生明显效果。从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。此时悬浮于溶液中的DNA丝状物相对含杂质较少，如果出现的丝状物较少，可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分钟。浓缩后的DNA丝状物，可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用)。如果DNA丝状物较少，不易吸附在玻璃棒上，也可以用筷子等表面粗糙的用具来帮助DNA分子缠绕。
DNA的纯化还有许多其他方法。例如，添加质量分数为25％的十二烷基磺酸钠(SDS)溶液，使蛋白质变性后与DNA分开。随后，加入氯仿—异丙醇混合液（体积比为24∶1），通过离心将蛋白质及其他杂质除去,取上清液。可重复上述操作几次，直至上清液变成透明的黏稠液体。此外苯酚可以迅速使蛋白质变性，抑制核酸酶的活性。利用苯酚处理后，离心分层，DNA溶于上层水相，蛋白质变性存在于酚层中，这时可用分液漏斗或吸管等仪器将二者分开。教师可以根据学校的条件让学生自己设计实验方案，比较实验结果。
5．DNA的鉴定
二苯胺法二苯胺试剂的配制及鉴定DNA的方法参见教科书。需要注意的是，二苯胺试剂在冰箱内可保存6个月，使用前需摇匀。
紫外灯照射法用蒸馏水配制质量分数为0.05%的溴化乙锭(EB)溶液，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹到蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中)，可呈现橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm处)。
电泳法此方法适合鉴定纯度较高的DNA。有条件的学校可以参考本专题课题2的实验案例和参考资料部分。
案例二 以菜花为实验材料进行DNA的粗提取
课前准备 将新鲜菜花和体积分数为95％的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24 h。
提取DNA的具体步骤
1.取材 称取30 g菜花，去梗取花，切碎。
2.研磨 将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。
研磨液的配制方法如下。将10.1 g Tris加入到50 mL蒸馏水中，使其溶解，然后，用2 moL/L的HCl溶液调节pH至8.0，再加入8.76 g NaCl 、37.2 g EDTA 、20 g SDS。待上述药品全部溶解后，再用蒸馏水定容至1 000 mL。
教材中建议采用洗发香波、洗涤剂等一些去污剂，使植物细胞膜破碎，释放DNA。学生可以设置对照实验，比较哪一种方法可以提取到纯度更高的DNA。一般实验室提取高纯度的DNA都采用一种阳离子去污剂──十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液，使细胞膜破碎，同时将DNA与植物中多糖等杂质分开，再用氯仿—异丙醇混合液（体积比为24∶1）抽提去除杂质蛋白，得到高纯度的DNA。
3.过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/min的转速，离心2～5 min，取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
4.沉淀 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95％的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)。沉淀3～5 min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。
我是学生物的，这是教材上的，至于3种方法我不知道啊。。。只是做一下任务，呵呵
4. DNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些
DNA的粗提取
①准备材料
将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24
h。
②取材
称取30
g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨
将碎菜花放入研钵中,倒入10
mL研磨液,充分研磨10
min
。
④过滤
在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1
000r/min的旋转频率,离心25
min,取上清液放入烧杯中)。在4
℃冰箱中放置几分后,再取上清液。
⑤加冷酒精
将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35
min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试剂
取0.1
mL
B液,滴入到10
mL
A液中,混匀。
②鉴定
取4
mL
DNA提取液放入试管中,加入4
mL
二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100
℃)加热10
min
。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
研磨液的配制方法
Tris：10.1
g(相对分子质量为121.14),先加50
mL
蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2
moL/L
的盐酸调至pH8.0,再加下述药品。
NaCl：8.76
g(相对分子质量58.44)
EDTA：37.2
g(相对分子质量372.24)
SDS：20
g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1
000
mL。
若在室温低于20
℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用。
研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离。
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
物质的量浓度为0.15
moL/L的氯化钠溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA的其他方法
用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。
3.将蜡纸放在紫外灯(260
nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280
nm处)。
O(∩_∩)O~
5. 提取细胞中的DNA和蛋白质都需要用蒸馏水涨破细胞 这句话为什么错了 DNA不能用蒸馏水吗
用蒸馏水涨破细胞多见于提取红细胞中的血红蛋白，在其他地方中的应用少见，提取DNA是不需要该操作的。而且无论是提取细胞中的DNA，还是提取蛋白质，都有很多的方法，所以“都需要”也是错误的。
6. DNA提取过程中所用到的主要设备有哪些他们各自使用的注意事项是什么
一：人体DNA的简易提取法
★所需的材料：①一茶匙盐，放进一杯水（自来水即可，绝对不能有杂质）里完全溶解、②一个干净的小玻璃杯、③一些洗涤液（去超市买正规的）、④一根滴管（可在化学品试剂店买）、⑤酒精度在50°以上的冰镇烈性酒（桶酿燕麦威士忌、质量上乘的杜松子酒、高度伏特加酒，或者抗菌酒精都能实现这项工作） ★制取方法：在干净的小玻璃杯里放入一茶匙洗涤液并用三茶匙水（自来水即可，绝对不能有杂质）稀释。用盐水在嘴里用力漱洗30秒钟左右，然后吐进稀释的洗涤液之中。用力搅拌混合物几分钟，然后非常小心地把两茶匙冰镇烈酒顺着玻璃杯的侧壁倒进去。如果你的手不能拿稳，可以使用滴管，把杯子稍微倾斜一下会对此有所帮助。这个步骤要求注意力非常集中，而且是非常关键的一步，必须要形成一个泾渭分明的水和酒之间的界限。如果你做到了细心谨慎，就将在盐和漱口水混合液的顶部形成单独的一层；等几分钟之后，你就会看到在酒之中开始形成纺锤形、白色、线状的团块样物质。这就是你的DNA。接下来如果有条件的话，可用1280倍的显微镜观察…… ★注意事项：在开始之前，一定要保证你的口腔是干净的。如果刚吃完东西，要等4个多小时后才能提取，以确保提取的精度。
二：动物DNA的简易提取法
（略为复杂一些） ★所需的材料：①鸡血细胞液5~10毫升（后面有鸡血细胞液的制作方法）、②铁架台、③铁环、④镊子、⑤三角架、⑥酒精灯、⑦石棉网、⑧载玻片（可在化学品试剂店买）、⑨玻璃棒、⑩滤纸、⑾滴管（化学品试剂店买）、⑿量筒（100ml一个）、⒀烧杯（100ml一个，50ml和500ml各2个）、⒁试管（20ml2个）、⒂漏斗（建议买3个）、⒃试管夹（建议买4个）、⒄纱布（建议买4个）、⒅体积分数为95%的酒精溶液（就是浓度为95%的酒精，实验前置于冰箱内冷却24小时，建议冷藏室的温度调节在4°~6°之间最好）、⒆蒸馏水（不少于500毫升）、⒇质量浓度为0．1%克/ml（毫升）的柠檬酸钠溶液、（21）物质的量浓度为2mol（摩尔）/L（升）和0．015mol/L的氯化钠溶液、（22）二苯胺试剂（本试剂是成瓶的）。 ★制取方法：①制备鸡血细胞→取刚杀过的鸡血（要干净，不能有杂质）50毫升左右，加入柠檬酸钠防止凝血；除去上面的清液，因为DNA主要存在于细胞核中。②提取核物质→加蒸馏水（一般是鸡血细胞的2倍半）并用玻璃棒搅拌不少于5分钟，使血细胞破裂，释放出的DNA往往和蛋白质结合在一起。③溶解核内DNA→DNA在高浓度的氯化钠溶液中溶解度很高，用2mol/L的氯化钠溶液可以加速核蛋白解聚，游离出DNA。④析出含DNA的粘稠物→加蒸馏水降低氯化钠溶液的浓度至0．14mol/L，此时DNA的溶解度下降，蛋白质的溶解度增高，从而使DNA和蛋白质分离，析出DNA（注意：此步骤要精确浓度）。⑤滤出含DNA的粘稠物→用纱布过滤得到丝状DNA的粘稠物。⑥DNA粘稠物再溶解→加入2mol/L的氯化钠溶液后，充分搅拌，使DNA溶解。⑦过滤含DNA的氯化钠溶液→用新纱布过滤。⑧提取较纯净的DNA→加入冷却的浓度为95%的酒精，使DNA沉淀、浓缩、形成含杂质较少的白色丝状物。⑨DNA的鉴定→DNA的鉴定可用二苯胺法，DNA遇到二苯胺变为蓝色；还可以用“甲基绿”法，“甲基绿”使DNA变为蓝绿色。 ★注意事项：①盛放鸡血细胞的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎后，DNA容易被玻璃容器吸附。因此，实验中最好使用塑料的烧杯和试管，可以减少提取过程中DNA的损失。②实验中搅拌含有悬浮物的溶液时，玻璃棒不要直插烧杯底部，同时搅拌要轻慢。③用“甲基绿”法鉴别DNA时，可将“甲基绿”直接滴到玻璃棒的丝状物上后，要用水充分冲洗掉浮色后再观察。
三：植物DNA的简易提取法
（提取时千万要注意里面的步骤！！！） ★所需的材料：①新鲜菜花（或蒜黄、菠菜）。②塑料烧杯一个。③量筒（规格和数量同上）。④玻璃棒一个。⑤尼龙纱布（数量同上）。⑥陶瓷研钵一个（最好用陶瓷的）。⑦试管（数量同上，没标明数量的要同时准备两个，以备用）。⑧试管架（数量同上）⑨试管夹（数量同上）。⑩漏斗（数量同上）。⑾酒精灯一个。⑿石棉网（数量同上）。⒀三角架。⒁火柴一把（小火柴）。⒂刀片一把（小刀即可）。⒃天平。⒄研磨液（可在化学品试剂店买）。⒅体积为95%的酒精溶液（体积就是浓度）。⒆二苯胺试剂一瓶。⒇蒸馏水（不少于500毫升）。（21）塑料离心机一台（也可用食品加工机代替）。 ★制取方法：①准备材料→将新鲜菜花和浓度为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室内，至少24个小时，建议48个小时，冷冻室的温度要调成-18°以下。②取材→称取30克菜花，去梗取花，切碎。③研磨→将碎菜花放入研钵内，倒入10毫升研磨液，充分研磨10分钟，建议15分钟。④过滤→在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液滤入烧杯中（有条件的可将滤液滤入塑料离心机中离心，用1000转/分钟的速度旋转，离心5分钟，取出上面的清澈液体放入烧杯中。[也可用食品加工机代替，但速度一定要有保证！]）在4°的冷藏室中放置5~6分钟后，再取上面的清澈液体。⑤加冷酒精→将一倍体积的清澈液体倒入两倍体积浓度为95%的冷酒精中，并用玻璃棒缓缓地轻轻地搅拌溶液（玻璃棒不要插入烧杯底部）。沉淀3~5分钟后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，絮状物会缠在玻璃棒上。⑥配制二苯胺试剂→取0．1毫升B液，滴入到10毫升A液中，混匀。⑦鉴定→取4毫升DNA提取液放入试管中，加入4毫升二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色（不变蓝）。用沸水浴（100°）加热10分钟。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化（逐渐出现浅蓝色）。 ★注意事项：①一定的冷冻时间是绝对要掌握好的，因为植物的DNA提取不易。②研磨的时间也要掌握好，理由同前。③要想好一切步骤，一举呵成，就是要抓紧时间，理由同前。
7. 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误的是（）A．酵母和菜花均可作为提取DNA的材料B．DNA既
A、理论上只要含有DNA的生物组织均可作为该实验的材料，因此酵母和菜花均可作为提取DNA的材料，故A选项正确；
B、DNA既可溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水，故B选项正确；
C、向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可使破裂细胞，释放DNA，但不会观察到玻棒上有白色絮状物，故C选项错误；
D、DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝，故D选项正确．
故选：C．
8. 菜花dna提取实验...请教
几种新材料的DNA粗提取与鉴定介绍
3.1新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)DNA粗提取与鉴定
一.材料用具
新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏斗,酒精灯,石棉网,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,二苯胺试剂,蒸馏水。
二.方法步骤
(1)DNA的粗提取
①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4S冰箱中放置几分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试 剂取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
9. DNA能溶解在蒸馏水中吗
DNA的亲水性,易溶于水。在无机物水中能溶解,在有机物中不能溶解。