『壹』 進行色譜分析時,分離效果,柱效,選擇性,怎樣算好,怎樣算差
裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。
多為金屬或玻璃製作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。
色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均採用填充柱。
色譜柱的分離效果取決於所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。
色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用於HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對於一般的分析只需5000塔板數的柱效;對於同系物分析,只要500即可;對於較難分離物質對則可採用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。
柱效受柱內外因素影響,為使色譜柱達到最佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結構(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術。即使最好的裝填技術,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏鬆,易產生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應。這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統中,柱外效應對柱效的影響遠遠大於管壁效應。
『貳』 如何測試色譜柱柱效是否降低
判斷色譜柱柱效下降可以通過以下幾個途徑:
1.看峰分離度怎麼樣,分離度直接關專系測試結果准確性屬,可以判斷柱效是否下降,柱效下降分離度一般會變差。
2.通過譜圖峰型的變化,是否有嚴重前伸和拖尾現象,峰型是否規則來看,如果峰型很差了,柱效已經下降了,可以及時採用乙腈和甲醇等溶劑進行修復。
3.通過壓力變化和出峰時間來判斷,一般柱效下降時伴隨著柱壓的升高和降低,此時出峰的時間也會和之前有很大差異。
4.還可以根據新的柱子的保留時間判斷,看重復性,平行性如何.
1)
保留時間變短;
2)理論塔板數降低;
3)峰對稱度變差;
4)分離度減小。
『叄』 離子色譜柱能用純水沖洗嗎,這樣是否會影響柱子的性能。
按看說明書或咨詢色譜柱廠商,防止損害色譜柱,離子柱都不便宜,小心為上。
用純水短時間內沖洗色譜柱,通常不會對色譜柱造成較大的損傷,但如果長時間用水沖洗色譜柱則
可能引起固定相流失和相塌陷現象,所以若非必要請盡量避免用純水沖洗色譜柱,建議在水中加入一定
量的甲醇或乙腈進行沖洗,通常水的含量<90%不會對色譜柱造成任何影響。
原因分析:
首先,由於目前所用的色譜柱大多以硅膠為基質,硅膠的溶解特點是在純水中的溶解度比在含有一
定濃度有機溶劑的流動相中要大得多,所以長時間的用純水沖洗會導致固定相的流失,引起柱效下降。
其次,對於常規的 C18 柱而言,由於C18 長鏈與水是不互溶的,C18 長鏈之間的相互作用力大於
C18 與水分子的作用力,長時間的用水沖洗,使得C18 長鏈之間相互靠近,水流的沖刷,導致相互聯結
的C18 長鏈倒伏在硅膠基質的表面,對疏水性物質的保留能力下降,即相塌陷。針對用純水沖洗容易出
現相塌陷的現象,有些廠家推出了純水柱(如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱),這種純水柱可以用純
水作流動相而不會產生相塌陷,這對只溶於純水的樣品的分析提供了一個很好的選擇。
第三,如使用過含緩沖鹽的流動相的色譜柱,用純水沖洗,並一定能將緩沖鹽完全洗去。因為,由
於緩沖鹽難溶於有機溶劑,C18 反相柱中用的填料是在硅膠表面上接上許許多多的C18 長鏈,相當於一
個疏水的有機相,而硅膠基體被有機物質包裹著,所以用純緩沖鹽水溶液做流動相時也許緩沖鹽不容易
到達硅膠基質,不至損害基體。但所用的流動相通常會含一部分有機溶劑,而且這些有機溶劑與C18
長鏈是互溶的,因此有機溶劑的加入增強了流動相滲入硅膠基質的能力,能使部分緩沖鹽達到硅膠基質。
同樣的道理,用純水沖洗只能洗掉表面的緩沖鹽,而滲入深處的緩沖鹽則仍然殘留在那裡。所以最好在
水中加入部分有機溶劑進行沖洗,一般的C18 柱通常用含水20%~90%都可以,含水的比例要視分析
時使用的流動相來定,原則上,用於沖洗的流動相中水的比例應該等於或高於(緩沖鹽用後清洗的情況,
推薦使用「等於」)分析時所用流動相中水的比例。
『肆』 那些HPLC色譜柱可以用純水
你問的應該是反相色譜柱,因為凝膠過濾用純水相是司空見慣的。
Agilent的Bonus系列,Aichorm的Aqua系列,都是回可以做純水答相的。
但你如果只是考慮梯度起點的高水相比例,那就不必了,普通的C18、C8都可以用純水相短時間沖洗,不超過10個柱體積,是沒什麼問題的。
『伍』 正相C18色譜柱進一點水會影響柱效嗎
正相C18色譜柱。判斷色譜柱柱效下降可以通過以下幾個途徑: 1.看峰分離度內怎麼樣,分離度直接關系容測試結果准確性,可以判斷柱效是否下降,柱效下降分離度一般會變差. 2.通過譜圖峰型的變化,是否有嚴重前伸和拖尾現象,峰型是否規則來看,如果峰型很差了,柱效已經下降了,可以及時採用乙腈和甲醇等溶劑進行修復. 3.通過壓力變化和出峰時間來判斷,一般柱效下降時伴隨著柱壓的升高和降低,此時出峰的時間也會和之前有很大差異. 4.還可以根據新的柱子的保留時間判斷,看重復性,平行性如何. 1) 保留時間變短; 2)理論塔板數降低; 3)峰對稱度變差; 4)分離度減小.
『陸』 正相色譜柱吸附了水分柱效為什麼會下降
判斷色譜柱柱效下降可以通過以下幾個途徑: 1.看峰分離度怎麼樣,分離度直接關系測試回結果准確答性,可以判斷柱效是否下降,柱效下降分離度一般會變差. 2.通過譜圖峰型的變化,是否有嚴重前伸和拖尾現象,峰型是否規則來看,如果峰型很差了,柱效已經下降了,可以及時採用乙腈和甲醇等溶劑進行修復. 3.通過壓力變化和出峰時間來判斷,一般柱效下降時伴隨著柱壓的升高和降低,此時出峰的時間也會和之前有很大差異. 4.還可以根據新的柱子的保留時間判斷,看重復性,平行性如何. 1) 保留時間變短; 2)理論塔板數降低; 3)峰對稱度變差; 4)分離度減小.
『柒』 進行色譜分析時分離效果柱效選擇性怎樣算好怎樣算差
要改善的條件很多,介紹幾種供參考1、色譜柱,色譜柱使用時間長了,柱效會降低,會影專響到分離度的,改善屬方法是更換新的色譜柱。如果已經是新的色譜柱了,分離度還不好,那可以採用更長一些的色譜柱,也會增加分離度。2、流動相的調節,通過調節流動相中各組分的比例,使流動相的極性發生變化,分離效率會不一樣,這要針對要檢測的成分具體情況進行分析確定。3、改變柱溫,相同條件下升高柱溫,會增大色譜柱的分離能力而提高分離度。
『捌』 請教:純水沖洗色譜柱,柱效降低,如何恢復
更換超純水柱。
『玖』 為什麼普通C18色譜柱不能用純水沖洗
容易引起疏水坍塌,把強保留物質沖出來,會毀了柱子的,所以水相不能超過95%,最開始的梯度淋洗也是高有機相到高水相,但是不是純水相。
『拾』 過柱色譜進行粗分的時候,柱子填裝過高,會不會導致柱效變差啊
理論上來說是的,因為在其他條件不變的情況下,柱長越長,待分離組分在柱中的時間就越內長,進而導致容組分在色譜柱中的擴散 作用越強,同時,組分在色譜柱壁上的時間越長會使拖尾越嚴重,柱效都會下降
一半柱長是直徑的6倍左右吧