❶ 有哪位高人可以指導一下,在提DNA實驗中,可否用超純水替代注射用水
不能啊,那樣人體遺傳細胞會出現問題
❷ DNA可不可以溶於水啊
樓上錯了,你做過實驗嗎.要看有機物是極性分子還是非極性分子.DNA是極性分子,水也是,DNA當然可以溶解在水裡,不然怎麼用於做實驗.提取的DNA可以直接溶解在超純水中,或者溶解在TE溶液中.溶解在水裡是無色溶液.
反而,酒精是非極性分子,DNA不容於酒精,提取DNA的時候就是利用這個原理.
❸ 請教高手,我提的玉米葉片DNA降解很厲害,跑瓊脂糖膠基本上沒有主帶,怎樣才能提取高質量的DNA
是用SDS法提的嗎?你首先確定SDS裂解液配的有沒有問題,一般這個溶液配好了其它的溶液不會有大問題。DNA酶污染的情況並不常見,只要滅菌了不會有問題。DNA用百分之百乙醇析出的步驟容易造成機械損傷,加乙醇後要快點混勻。適當降低離心的轉數,操作動作輕一點,防止機械斷裂
補充:葉片取下來要零度保存,不要放太久,久了DNA也會降解,磨完樣不要讓乾粉凍融,馬上加SDS。操作時候溫柔點,適當降低離心轉數。吸上清的時候把槍頭剪去一點。就這些辦法了……多試試,應該沒問題吧。玉米DNA,應該不是很難提,我提小麥水稻的DNA,基本上沒遇到過問題
❹ 內生真菌DNA的提取方法
菌絲基因組 DNA的提取
取少量菌絲粉,採用 CTAB法提取 DNA,加適量滅菌超純水 (含 20 pg·ml。RNase)溶解 DNA,37~C處理 l h後, 一20℃保存備用。
❺ 溶解DNA為什麼用ddH2O而不是H2O
事實上來,你這個問題就有疑問。自可能你最後保存DNA的是ddH2O,但是最規范的操作是用TE緩沖液保存,裡面的EDTA對DNA物理化學性質的穩定有很大的作用。退而求其次的方法是用ddH2O,裡面還有雜質少,利於DNA物理化學性質的保存。溶解後建議放在-4℃及以下溫度保存。
希望對你有幫助。
❻ 請問DNA提取過程中70%乙醇是如何配製的所用水是去離子水還是經過其他處置的水
就是體積比
70ml無水乙醇加30ml的去離子水 去離子水要滅過菌的
❼ 提取DNA時為什麼要對耗材滅菌
滅菌的目的是為了防止菌體DNA的污染,當然也只是排除了耗材來源的外來菌種污染而已,空氣中還有材料本身所帶的菌種是無法去除的,那麼問題的關鍵就在於你拿到目的基因組的下游要進行什麼操作了,如果污染對下游沒有影響,那麼滅不滅菌都沒關系了,通常情況下,下游應該是擴增,擴增的特異引物在親緣關系較遠的物種間是不能通用的,也就是說你在提取大豆基因組的時候只要不污染大豆近緣種的基因組,就不會對整個實驗產生影響,我做這么多年實驗,提過植物,動物,微生物的基因組,都沒有進行過滅菌操作,至於水的問題,溶解DNA的水通常都是用ddh2o,現在的實驗室所用的水通常都是從millipore純水儀里接出來的,具體指標不清楚哦~普通的去離子水進行擴增和測序都是不好用的
❽ 怎麼溶解DNA
如果是要馬上做酶切或者連接,就用超純水溶解,超純水要提前滅菌,如果是要長期保存,就用TE溶解,TE會配吧?也要提前滅菌。
❾ dna的提取方法
一.DNA的提取方法簡介
為了研究DNA分子在生命代謝中的作用,常常需要從不同的生物材料中提取DNA.由於DNA分子在生物體內的分布及含量不同,要選擇適當的材料提取DNA。
動植物中,小牛胸腺۰動物肝臟۰魚類精子,植物種子的胚中都含有豐富的DNA。
微生物中,谷氨酸菌體含7%~10%,麵包酵母含4%,啤酒酵母含6%,大腸肝菌含9%~10%。
從各種材料中提取DNA方法不同,分離提取的難易程度也不同。
對於低等生物。如從病毒中提取DNA 比較容易,多數病毒DNA 分子量較小,提取時易保持其結構完整性。
從細菌及高等動植物中提取DNA難度大一些。細菌DNA 分子量較大,一般達2×10 道爾頓。因此易被機械張力剪斷。細菌DNA,除核DNA 外,還有質粒DNA 等。
1、核酸的理化性質
RNA和核苷酸的純品都呈白色粉末或結晶,DNA則為白色類似石棉樣的纖維狀物。除肌苷酸、鳥苷酸具有鮮味外,核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是極性化合物,一般都溶於水,不溶於乙醇、氯仿等有機溶劑,它們的鈉鹽比游離酸易溶於水,RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L。DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。在酸性溶液中,DNA、RNA易水解,在中性或弱鹼性溶液中較穩定。
天然狀態的DNA 是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在於細胞核中。要從細胞中提取DNA 時,先把DNP抽提出來,再把P除去,再除去細胞中的糖,RNA 及無機離子等,從中分離DNA 。
DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中,幾乎不溶解,如在0.14 mol/L的氯化鈉溶解度最低,僅為在水中溶解度的1%,隨著鹽濃度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化鈉中的溶解度很大,比純水高2倍。
RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小,在0.14mol/L氯化鈉中溶解度較大。因此,在提取時,常用此法分離這兩種核蛋白。
2.細胞的破碎
細菌有堅硬的細胞壁,首先要破碎經胞。方
法有三種:①機械方法:超聲波處理法、研磨法、勻漿法;②化學試劑法:用SDS處理細胞; ③酶解法:加入溶菌酶或蝸牛酶,都可使細胞壁破碎。
由於高等動物DNA 主要存在於細胞核與線粒體中,所以提取時有兩個困難(高等植物與此類似):
①破碎細胞難;從處死動物٠分離組織器宮到破碎細胞費時長。在此時期間DNA 可能會被DN ase降解,而動物組織:特別是肌肉組織很難破碎,即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器,易造成DNA 斷裂。
②分子量大,一般比細菌的大2—3個數量級,比病毒的大4—5個數量。對不同生物材料,要根據具體情況選擇適當的分離提取方法。
3.DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來.
也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA.
(2).陰離子去污劑法:
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法:
苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相,而DNA溶於水相。離心分層後取出水層,多次重復操作,再合並含DNA 的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 .
( 4).水抽提法:
利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA,然後將沉澱溶於水中,使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66% ٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
❿ 回收dna膠時若要稀釋是用depc水稀釋嗎
DNA比較穩定,DEPC主要是處理RNase的,在有RNA樣品時使用.
不太明白,如果是膠回收,一般都直接用試劑盒,裡面帶的buffer就可以用.
你說的應該是回收以後的稀釋吧.主要看稀釋後樣品做什麼用,一般用超純水稀釋就可以了.