『壹』 pcr實驗室分為哪四個區
PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和准備區、標本制備區、擴增反應混合物配製和擴增區、擴增產物分析區。
為避免交叉污染,進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和准備區→標本制備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
PCR原理
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在DNA聚合酶的參與下,根據鹼基互補配對原則復製成同樣的兩分子拷貝。
在實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,加入設計引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
但是,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,每次循環都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,制約了PCR技術的應用和發展。
『貳』 PCR實驗室規劃設計怎麼布局
SICOLAB這樣布局設計:
一、臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區域:
1、試劑貯存和准備區
2、標本制備區
3、擴增反應混合物配製和擴增區
4、擴增產物分析區
如使用全自動分析儀,區域可適當合並。
二、各工作區域必須有明確的標記,避免不同工作區域內的設備、物品混用。
三、進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行,即試劑貯存和准備區→標本制備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。
SICOLAB實驗室整體設計建設工程、生物樣本庫建設工程、GMP環境建設工程、環保工程。
『叄』 PCR實驗室離心機應存放在第幾區
1. 要有緊連PCR實驗室的高壓滅菌鍋。
2. PCR實驗室內每個房間的所有進、出風口均需加裝高效過濾器。
3. 標本處理間必須配備A2生物安全櫃和通風櫥並有外連,外連出口需加高效過濾膜。
4. PCR實驗室的壓力梯度,從高到低單一流向:試劑制備區--標本制備區--擴增區--產物分析區,建議調整為:試劑制備區+10pa>標本制備區0pa>擴增區—10pa>產物分析區—15pa~—20pa。緩沖間壓力梯度為 試劑制備區—10pa、標本制備區—10pa、擴增區—5pa、產物分析區—10pa。
5. 外走廊內距離標本制備區的門最近的地方加裝一個水池(手衛生用),並放一個半截櫃(用於存放和穿防護服等);標本制備區實驗室內有兩個水池(一個傾倒廢液,一個用於手衛生),此區的緩沖間加裝一個水池(用於脫防護服時手衛生)。
6.建議緊鄰PCR實驗室潔凈區設置廁所、淋浴房和休息間。
『肆』 標準的pcr實驗室一般是正壓的工作區是哪裡
試劑准備區。
試劑准備區用於試驗試劑的准備,該區域為正壓,目的是防止污染物質溢入。
此區主要是進行試劑的制備分裝和主反應混合液的制備,試劑盒用於樣品製作的材料應直接運送至該區域。
『伍』 請述如何進行pcr實驗室的工作獨立分區,pcr實驗室分區有哪些要求
要求及功能分區PCR實驗室分為四個區域,進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區域使用 不同的工作服(例如不同的顏色)。
工作人員離開各工作區域時,不得將工作服帶出,
四區域分別 1.試劑配製區n2.樣品處理區n 3.核酸擴增區n 4.產物分析區n 如使用全自動分析儀,區域可適當合並,三四區可合並為擴增產物分析。
各區的功能是:
1.1.1 試劑准備區:擴增試劑的配製、分裝和保存。
1.1.2 樣品處理區:樣品登記、分裝;核酸提取、保存和加樣。
1.1.3 擴增產物分析區:擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。
1.2 擴增前區與擴增後區應嚴格分開,須使用不同的房間,兩區之間最好有一定的間隔。
1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配製。
1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區和試劑准備區可設在同一房間內: 1.4.1 在生物安全櫃內操作。
1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封並一次性使用。
1.4.4 用有效的方法對操作區域和共享器具在實驗前後進行清潔及消毒。
設計要求:
PCR實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式,現要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR 實驗,通常應經過試劑配製、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還 應增加樣品粉碎過程。
一、分散形式PCR實驗室所謂分散形式PCR實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。
對於這種布置形式的PCR實驗室,由於各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
二、組合形式
所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區域 的形式。對於組合形式PCR實驗室,由於各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體 布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間,以減少室內外空氣交換。 試劑配製室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染,可以通 過控制進風風量大於排風風量達到正壓效果。
核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通 過控制排風風量大於進風風量達到負壓效果。
在理想情況下,PCR實驗室緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向 室內。
PCR實驗室進風由原有中央空調控制,要求將中央空調風口安裝到指定定點,且高度為地面鋪 裝好後2600mm處。 如果使用熒光PCR儀,擴增室和產物分析室可以合並。
若房間進深允許,可設PCR內部專用走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面,緩沖間 比專用走廊更有意義。 各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免 實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。 實驗室的牆體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好;
所有陰角宜採用圓弧形線條過渡;牆體內 壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
主要設備 試劑准備區 儀器設備主要有冰箱、超凈台、加樣器、混勻器、天平和離心機等,加樣器、天 平除了要專用外,還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈台中進行 擴增反應混合液應使用分子 生物學級的,試劑制備好後應有質檢:一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。 標本制備區 儀器設備主要有生物安全櫃、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等 擴增區 擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈台、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴 增儀需進行校準。並配備UPS電源,以防止由於電壓的波動,停電對擴增效果的影響。 分析區 本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規定的.
主體結構:主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均採用鋁合金50內圓角鋁,從而解決容易污 染、積塵、不易清掃等問題。
結構牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。 標準的四區分隔和氣壓調節:將PCR過程分成試劑准備、標本制備和PCR擴增,產物分析四個獨立的實驗區。整個區域有一個 整體緩沖走廊。
每個獨立實驗區設置有緩沖區,同時各區通過氣壓調節,使整個PCR實驗過程中試 劑和標本免受氣溶膠的污染並降低擴增產物對人員和環境的污染。
可打開緩沖區,緩沖區和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣,在實驗區的外牆上和各扇門上 都安裝有風量可調的回風口,空氣通過回風口向室內換氣。
消毒:在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑准備區和標本制備區 還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。 不銹鋼傳遞窗:試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在 傳遞過程中不受污染(人物分流)。
地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便於進行清掃,耐腐蝕。 照明燈具要選用凈化燈具,能達到便於清洗、不積塵的特點。 在建設的過程中應注意: 規范的安裝流程和全面的服務流程。
『陸』 標准PCR實驗室設計原則是什麼
(一)標准PCR實驗室的工作區
(1)試劑准備區
設置有實驗桌、櫃子、冰箱、可移動紫外燈、與標本制備區連通的傳遞窗和椅子,在實驗桌上可放置實驗儀器設備(包括離心機、震盪器、移液器、離心管、廢液缸和垃圾筒等)。
(2)標本制備區
設置有實驗桌、冰箱、生物安全櫃、可移動紫外燈、水槽和椅子,在實驗桌上和生物安全櫃內還放置有實驗儀器設備(包括離心機、恆溫金屬浴、移液器、離心管、廢液缸和垃圾筒等)。
(3)PCR擴增區
設置有實驗桌、櫃子、與標本制備區連通的傳遞窗和椅子,在實驗桌上放置有實驗儀器設備(包括定量PCR擴增儀、電腦、列印機、廢液缸和垃圾筒等)。前面設置有專用走廊,走廊的一側是各實驗區的緩沖區。三間實驗區的布置依次為試劑准備區,標本制備區以及PCR擴增區。
(二)標准PCR實驗室各工作區之間注意事項
(1)各工作區必須有明確的標記,避免不同工作區域內的設備、物品濫用。
(2)進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行,即:試劑准備區→標本制備區→PCR擴增區。
(3)不同的工作區域使用不同的工作服,工作人員離開各工作區域時,不得將工作服帶出。
(三)氣流方向設置
(1)為了防止環境對擴增產物的影響,按臨床基因擴增實驗室調協要求,各實驗區的氣流設置方向為:空氣由試劑准備區流向緩沖區,標本制備區流向緩沖區,緩沖區流向PCR擴增區(如圖3所示)。
(2)工作時,應使緩沖區、緩沖區和PCR擴增區為負壓,其它各室為「0」壓或「+」壓。可打開緩沖區,緩沖區和PCR擴增區的排風扇往外排氣,並且在實驗區的外牆上各扇門上都安裝有風量可調的回風口,空氣通過回風口向室內換氣。
『柒』 PCR實驗室的布局應該怎樣
基因擴增實驗又稱PCR實驗,其特點是能將微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物學研究和實驗的常規方法,廣泛應用於生物學各個領域,例如:艾滋病檢測、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA指紋、個體識別、親子鑒定及法醫物證,動、植物檢疫,動物及其衍生產品檢測,動物飼料、化妝品、食品衛生檢測,轉基因作物與轉基因微生物檢測等。
一、PCR實驗室布局
PCR實驗室原則上為試劑准備區、樣品制備區、擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域並設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密相連,需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區,後兩區為擴增後區,擴增前區與擴增後區應嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區流向擴增後區,即從試劑准備區→樣品制備區→擴增區→擴增產物分析區,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增後區,不得逆向流動。各工作區頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
二、實驗室各區功能及主要設備
1、試劑准備區:主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用於樣品製作的材料應直接運送至該區,不得經過其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內,並在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振盪器等。
對於氣流壓力的控制,本區並沒有嚴格的要求。
2、樣品制備區:主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全櫃、離心機、加樣器、振盪器、恆溫水浴等。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。
3、擴增區:主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑准備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有:擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。
4、擴增產物分析區:擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
三、PCR實驗室通風系