❶ 基因測序,pcr對純水有什麼要求
PCR產物直接測序技術現已成為分子生物學和基因組學研究中的一個重要技術,廣泛用於基因突變檢測、遺傳性疾病診斷、單核苷酸多態性研究、基因組重疊序列群等.與傳統克隆測序技術相比較,直接對PCR擴增的DNA進行測序,省去了耗時的克隆步驟,避免了傳統的細菌培養,模板提取等重復性操作,可以從少量的原始樣品中得到正確的DNA序列信息.PCR產物直接測序技術具有快速、簡便、穩定經濟的優點. 試驗試劑 PCR擴增的雙鏈DNA模板長約20個核苷酸的DNA引物 DNA聚合酶測序膠 0.1mol/L DDT α-32P-dATP dNTP/ddNTP混合物(80μmol/L/8μmol/L) dNTP(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L) 測序反應緩沖液:40mmol/L Tris-HCl(pH7.5),20mmol/L MgCl2,50mmol/L NaCl 終止緩沖液:95% 甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05% 溴酚藍,0.05% 二甲苯腈試驗步驟: 1、 4個微量離心管中各加入dNTP/ddNTP混合物2.5μl,混合物37OC溫浴5min,備用. 2、 在一個空的微量離心管中加入1pmol的PCR擴增雙鏈DNA,10pmol測序引物,2μl 5×測序緩沖液,加雙蒸水至總體積10μl,96OC加熱8min,冰浴泠卻1min,4OC 10000g離心10s. 3、 加入2μl預冷的標記混合物(dCTP、dGTP 、dTTP 各0.75μmol/L),α-32P-dATP 5μCi,1μl 0.1mol/L DDT,測序酶2U,加水至15μl,混勻後置冰上2min,標記新合成的DNA鏈. 4、 在第1步驟的4個管中各加入3.5μl標記反應混合物,37OC溫浴5min.每管各加入4μl終止液. 5、 樣品在80OC的水浴中熱變性5min,每一泳道加2μl 加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項: 1.?PCR產物要有一定的長度(>200bp),因為測序結果兩端20-30bp的電泳峰圖的准確性較低. 2.?純化PCR產物可通過離子交換層析使擴增的DNA段與反應剩餘的dNTP及引物分離;也可通過瓊脂糖凝膠電泳,將PCR產物與非特異性擴增產物和引物分離開來;如果擴增的特異性較高時,可直接通過酚:氯仿抽提,乙醇沉澱的方法來純化. 3.?測序引物設計原則類似於PCR引物設計,可在DNA合成儀上合成20個左右的核苷酸作為引物,經過高壓液相層析或聚丙烯醯胺凝膠電泳純化後,即可用作測序引物. PCR循環測序法 PCR循環測序法是將PCR擴增和核酸序列分析技術相結合,從而形成的一種測定核苷酸序列的研究方法,也稱作線性擴增測序.該方法採用PCR儀加熱使DNA模板變性,在TaqDNA聚合酶作用下,以溫度循環模式在模板上進行多輪的雙脫氧核苷酸測序反應,線性擴增標記的DNA分子. PCR循環測序法與以往的測序方法相比,其優點在於:大大減少所需的模板量;能提高測序反應產生的信號,降低了操作的復雜性,且聚合酶的用量減少;可在小量制備的模板上進行篩選反應;高溫下進行的測序反應使DNA聚合酶催化的聚合反應能夠通過模板二級結構的區域;雙鏈閉環DNA可以直接作為反應模板應用,不用作預先鹼變性處理.由於PCR循環測序法能夠簡單、快速地檢測特定序列,因此, PCR循環測序法在核酸序列分析研究中受到廣泛的重視. 試驗試劑: DNA測序試劑盒 dNTP ddNTP 丙烯醯胺雙丙烯醯胺尿素 TEMED(N,N,N『,N』-四甲基乙二胺) 過硫酸銨 6%測序膠:6%丙烯醯胺,7mmol/L 尿素,1×TBE. 10×測序緩沖液:100mmol/L Tris-HCl(pH8.8),500mmol/L KCl,40mmol/L MgCl2,0.01%明膠,20μmol/L dATP,50μmol/L dCTP,50μmol/L dGTP,50μmol/L dTTP 終止混合液:ddATP (600μmol/L),ddCTP (600μmol/L),ddGTP (100μmol/L),ddTTP(1000μmol/L) 終止緩沖液:95%甲醯胺,20mmol/L EDTA,0.05%溴酚藍,0.05%二甲苯腈試驗步驟 1、 4個小離心管,每個小管加入3μl的終止混合液,將管子放在冰上. 2、 在DNA模板中加入引物(4pmol), 4μl 10×測序緩沖液, 10μlα-32P-dATP, 2U TaqDNA聚合酶,加雙蒸水到30μl徹底混勻,每管7μl加入上面4個小管中. 3、 反應液上加30μl的石蠟油. 4、 95OC 30S,50OC 30S,72OC 60S共30個循環,可根據具體的情況進行適當的調整循環條件及循環次數. 5、 反應結束後在油層下加入5μl的終止緩沖液並用加樣槍混勻. 6、 上樣前將樣品在大於80OC的水浴中熱變性5min,每一道加2μl加到測序膠上,電泳分離這些片段. 注意事項: 1、 制備測序模板:PCR 擴增的產物可以經過低熔點的瓊脂糖凝膠電泳純化回收後,用於序列分析;可經過柱層析純化,去除PCR 反應後剩餘的dNTP和引物後,用於序列分析.PCR 產物也可不經純化直接用於測序,但是這種測序產生的結果較差,建議測序之前應進行PCR產物的純化.各種標準的質粒制備方法所純化出的質粒均可作為測序模板使用.用標准方法制備的M13噬菌體、粘粒、λDNA都適合用作測序模板用.但要注意的是反應體系中不應有與引物互補的非目的基因序列,否則將會導致測序實驗的失敗. 2、 測序引物:測序引物是指合成的與測序模板鏈特異性互補的寡核苷酸序列.可用α-32P-dATP和T4多聚核苷酸激酶對引物的5『端進行標記,反應體系中引物、激酶和α-32P-dATP要保持在最佳的比例,以得到高比活性的標記引物;也可用α-32P-dATP標記新合成的DNA鏈.引物的濃度不宜高,否則容易形成引物二聚體,或產生非特異性的擴增引物. 3、 酶:各種缺乏3『—5『端外切活性的耐熱DNA聚合酶都可以用於循環測序,其中TaqDNA聚合酶在DNA測序中最為常用.雖然應用PCR循環測序法能夠簡單、快速的進行基因序列的測定,但仍未能適應大規模DNA序列測定的需要,而PCR循環測序法、熒游標記和自動測序儀的聯合使用成為大規模基因組測序的主要技術.該技術是採用熒游標記引物或雙脫氧核苷三磷酸,反應產物經聚丙烯醯胺凝膠電泳後,經特定的DNA序列分析儀和分析系統處理待測的DNA序列.它的應用減輕了DNA序列測定的工作量,提高了測序的效率.
❷ 中小型綜合醫院檢驗科都需要哪些設備回答全面一點,謝謝!
血細胞分析儀、尿沉渣、生化分析儀、血凝儀、離心機、水浴箱、顯微鏡、孵箱、生物安全櫃、純水機、冰箱、電腦、列印機、化學發光、洗板機等等
檢驗科設備有很多,一般包括血液細胞分析儀XFA6100、血氣電解質分析儀、血氣分析儀、酶標儀、洗板機、生化分析儀、血凝儀、特定蛋白分析儀PA8800等等,在檢驗科設備行業,國內外有很多不錯的醫療器械生產廠家。
另外,放射科設備我知道的有數字化X光機、數字DR、胃腸機、乳腺鉬靶機、C型臂X光機PLX7200、醫用拍片機,這些設備當中又分很多型號和功能,這具體還是要自己跟廠家進行了解~~
以上僅供參考~具體還是要自己去了解~~
首先參考這個網頁 http://..com/question/237878917.html 明白二級醫院里有哪些必備的設備。 看看哪些是和檢驗科、放射科、病理科有關的。
其次,國家再沒有關於你提問的這三個科室的非常詳細、明確的硬體要求了。
第三 關於檢驗科 你可以看看這個文件 衛生部關於印發《醫療機構臨床檢驗項目目錄》的通知 其中列出了1000項左右的檢測項目。看看你們醫院需要開展哪些項目,再考慮配置相應的硬體。 關於各個項目的檢驗方法 你可以參考全國臨床檢驗操作規程 第三版
放射科 關鍵看你做什麼項目((一)放射治療;(二)核醫學;(三)介入放射學;(四)X射線影像診斷。)一般分為上述4種,具體含義可參考《放射診療管理規定》,二級醫院一般只限於三和四 (三)開展介入放射學工作的,具有帶影像增強器的醫用診斷X射線機、數字減影裝置等設備;(四)開展X射線影像診斷工作的,有醫用診斷X射線機或CT機等設備。 關於其他一些設備(比較昂貴的)如果感興趣可以了解一下
甲類 需要衛生部批准
1、X線---正電子發射計算機斷層掃描儀(PET--CT,包括正電子發射型斷層儀即PET)
2、伽瑪射線立體定位治療系統(γ刀)
3、醫用電子迴旋加速治療系統 (MM50)
4、質子治療系統
5、其它未列入管理品目、區域內首次配置的單價在500萬元以上的醫用設備
乙類(省級衛生行政部門管理)
1、X線電子計算機斷層掃描裝置(CT)
2、醫用磁共振成像設備(MRI)
3、800毫安以上數字減影血管造影X線機(DSA)
4、單光子發射型電子計算機斷層掃描儀(SPECT)
5、醫用電子直線加速器(LA)
關於病理科
二級綜合醫院病理科至少應當設置標本檢查室、常規技術室、病理診斷室、細胞學製片室和病理檔案室;參考(病理科建設與管理指南(試行))
申明:我不是臨床工作人員,相信臨床工作人員也不會知道這么廣的東東 尤其一下子來了三個科室 你如果一個科室一個科室問 臨床人員還可以回答你 你問這么多 別人恐怕就不大知道了 我是衛生監督人員 一個飽受社會 尤其是衛生系統內部人士瞧不起的單位。希望我的回答可以 打消一點點大家的這種觀念。
希望我的回答能夠幫到你
❸ 細胞實驗室是否需要純水,超純水,設計時要不要把純水
細胞實驗室肯定會用到純水、超純水的;不過細胞實驗室用水量不會太大,可以選用小型實內驗室純水系統容,現用現制;例如賽多利斯arium® mini 實驗室純水系統是針對實驗室用水量低於10L而設計,用於制備非關鍵應用所需的緩沖液和培養基。
❹ 微生物配置培養基用什麼水
1,配方制定,確定配置體積,計算要配製體積下的各組分需稱量的質量。
2,稱量。
3,溶解。
4,定容,用蒸餾水補加,將配製的溶液體積達到規定體積。
5,分裝。
6,消毒。
7,使用。
注,固體培養基的情況略有不同,分裝有區別。
❺ 水思源純水設備的應用范圍有哪些咨詢下智慧的百度人兒們
水思源產品涵蓋:
醫院:純水處理運用於實驗室、檢驗分析、血液凈化、消毒供應中心、內鏡洗消中心、ICU等科室領域;
污水處理運用於實驗室、口腔科、檢驗科、手術室、ICU、消化內鏡中心、病理科等科室領域;
醫葯、化工、冶金生產用污水、純水、超純水設備;
學校/醫院、小區直飲水工程;
高校、科研、各級檢測機構及工礦企業實驗用超純水設備;
食品行業用瓶裝、桶裝、各種飲料、酒類制水設備;
各類行業水處理設備設計、安裝/改造、維修保養、培訓指導等技術服務; 還有不清楚的可以自己網路。
❻ 醫院里的水是開水還是純水
有的醫院是直飲水。直飲水(direct drinking water),又稱為健康活水,指的是沒有污染、沒有退化,符合內人體生理需要(容含有人體相近的有益礦質元素),pH值呈弱鹼性這三個條件的可直接飲用的水。
有的醫院用的是自來水加熱成開水的。
❼ 醫院集中供水系統的供水系統理論
投建醫院中央集中制水、分質供水系統不僅可以提升醫院現代化管理水平,更重要的是它能產生更大的效益。中央集中制水、分質供水系統以其水質可控性好、總投資費用少、運行成本低、機房可選性大、總佔地面積小等優點可快速替代各科室獨立水機供水系統。
在醫院現代化建設過程中,醫院純水工程盡管投資額比重不大,但涉及科室較廣。隨著醫院用水質量規范逐漸完善,已越來越受到各級醫療衛生機構領導的重視。美國、日本等經濟較為發達的國家,早在20世紀70年代就已相繼建立並實施了較為健全的醫院純水使用管理制度及不同科目的純水標准。隨後,有越來越多的醫院建立起了中央集中制水、分質供水系統。所謂中央集中制水、分質供水,就是用一套水機對自來水進行深度處理,使其達到各科室可直接使用的水質標准,再分別用管網供給各科室使用。我國自20世紀末引進並實施了中央集中制水、分質供水的理念和方案。近年來,中央集中制水、分質供水系統,因其獨特的優勢正在快速替代原有的獨立供水設備。
一所綜合性醫院,至少需要生化檢驗用水、病理科用水、血透用水、中心供應室用水、手術沖洗用水、DSI導管沖洗用水、牙科沖洗用水、產科洗嬰水、制劑室用水等高質量的純水。在我國醫院現行的設施中,在20世紀90年代初以前投資建設的綜合大樓內,基本上還是沿用各科室獨立水機供應純水。在近幾年新建、改建的綜合性醫院中,為最大限度地利用資源,進一步提高醫院現代化管理程度,相繼採用了中央集中制備純水、分質供水系統模式.
中央純水系統是由預處理系統、反滲透純水系統、EDI深度除鹽系統、後處理系統、循環供水系統組成的多功能全自動裝置。使用安全、方便,運行費用低廉,產水水質穩定的全自動成套設備。該設備主要用於血透室、生化室、口腔科、供應室中心實驗室、制劑室、手術室等集中供水。
❽ 細胞實驗室是否需要純水、超純水,設計時要不要把純水系統設計進去
你做細胞實驗基本是離不開純水和超純水的,不論你是做動植物實驗、細胞免疫化學、PCR實驗、蛋白質純化以及電泳/凝膠分析,都是要用到超純水的。建議你設計時最好把超純水系統也設計進去,以後你的幾個實驗室直接用設計好的超純水系統的管道取水即可。你可以聯系南京權坤。
❾ 什麼是醫用純水
事實上醫來用純水與源飲用純水最大區別在於水質標准不同,雖然都是與人體直接接觸,但是醫用純水的標准相對來說更高一些。醫用純水是通過醫院水處理設備製取得來,原水經過雙級反滲透工藝去除有毒有害的各類雜質的同時也將水中的礦物質全部去除,只保留水分子,而飲用純水則保留了對人體有益的各種礦物質,滿足人們從飲水中對微量元素的需求。
在醫療機構,例如醫療設備清洗消毒,血液透析以及病理檢驗,臨床醫療都需要大量的純水,如果水中有殘留例子,則很有可能影響診療效果,檢驗分析結果偏差等等,所以醫用純水的水質標准非常高至少要≥15MΩ.CM。
醫用純水與飲用純水在製取工藝原理上大致相同,只是不同於水質標准,醫院用水相對來說更加嚴格。
❿ 實驗室純水分為幾級嗎
實驗室純水分四個等級:
1、蒸餾水:
實驗室最常用的一種純水,雖設備便宜,但極其耗內能和費水且速度慢容,應用會逐漸減少。蒸餾水能去除自來水內大部分的污染物。
2、去離子水:
應用離子交換樹脂去除水中的陰離子和陽離子,但水中仍然存在可溶性的有機物,可以污染離子交換柱從而降低其功效,去離子水存放後也容易引起細菌的繁殖。
3、反滲水:
反滲水克服了蒸餾水和去離子水的許多缺點,利用反滲透技術可以有效的去除水中的溶解鹽、膠體,細菌、病毒、細菌內毒素和大部分有機物等雜質。
4、超純水:
超純水在TOC、細菌、內毒素等指標方面並不相同,要根據實驗的要求來確定,如細胞培養則對細菌和內毒素有要求,而HPLC則要求TOC低。