實驗設計分離純化養殖尾水的細菌

① 設計分析純化大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草壓寶桿菌混合菌液的實驗程序並解析其理論原理

先將混合菌液稀釋100倍 1000倍 10000倍……等幾個梯度
然後用接種換蘸去這些液體在培養基中劃Z字形接種
總會有一個梯度接種時可以將這些細菌分開
原理就是稀釋的菌液當中可以蘸取單個的細菌
劃Z 字線呢就可以把單個細菌分離開

② 生物實驗設計，關於培養細菌，和細菌的分離與計數的具體操作步驟

細菌的培養步驟：配置培養基（計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板），接種細菌（平板劃線法、稀釋塗布平板法等），恆溫箱培養。

土壤中細菌的分離與計數：土壤取樣→制備土壤懸液→梯度稀釋→塗布平板→培養觀察→計數

。

③ 請用實例設計分離生物大分子目標物的實驗方案及其可行性分析

1、根據生物目標物分離純化的特點用實例設計實驗方案？？
參考答案：
1.目的與意義（答到目的得2.5分，答到意義得2.5分）
隨著科學技術的發展及社會的進步，人們對食品有了新的要求，從單純攝取營養成分為目的轉變到攝取對健康有益、對防病有效的成分等多種目的，消費者對高糖高熱量興趣轉向低糖低熱量、人體難以消化、並可防齲齒、具整腸的作用糖類。
低聚乳果糖(lactosucrose)甜度低、熱量含量低，難以被人體消化，不被口腔酶分解，有防止齲齒功能。同時它又是一種雙歧桿菌的增殖因子，可以選擇性地促進雙歧桿菌的繁殖，使其在腸道中佔有優勢，從而改善腸菌群。此外人們發現低聚乳果糖能促進人體對鈣的吸收，從而可治療骨骼疾病。由於其具有優越的生理功能特性和良好的理化特性，深受消費者和食品、制葯、日化、飼料等行業的青昧，市場需求不斷上升。但是商業化低聚乳果糖產量低、費時長、工藝復雜、成本高，因此，利用基因重組技術、現代發酵技術、固定化酶技術、膜分離技術來實現低聚乳果糖高效低成本工業化生產具有重要意義，它將為低聚乳果糖在食品、動物飼料中、醫葯工業中的廣泛應用奠定原料基礎。

2.擬採用的技術路線（流程圖合理並列出分離方法得7分，流程圖合理未列出分離方法得4分，流程圖不合理得1分）

克隆β-半乳糖苷酶的基因 → 構建工程菌

β-呋喃果糖苷酶的發酵條件優化

β-呋喃果糖苷酶純化

蔗糖和乳糖的混合液→固定化β-呋喃果糖苷酶

分離反應液→固定化酶回收

糖漿產品→納濾膜純化→噴霧乾燥

含低聚乳果糖70％粉末 ← 冷凍乾燥 ← 蒸發濃縮含低聚乳果糖95％粉末

3.本研究的技術特點及技術優勢（答到技術特點得2分，答到技術優勢得2分）
目前日本公司均採用液體發酵法生產低聚乳果糖，生產用酶只能利用一次，後處理工藝需要活性炭脫色和離子交換樹脂除鹽，產品的總低聚乳果糖含量只有35-55%,還有約50%的葡萄糖、乳糖和蔗糖等副產物。本課題以乳糖和蔗糖為原料進行深加工，採用固定化酶法生產-納米膜純化耦合技術生產低聚乳果糖，生產用酶可反復利用，後處理工藝無需脫色和離子交換，工藝簡化流程縮短，糖漿生產成本大幅度下降；並結合採用納米膜過濾高新技術，能生產低聚乳果糖純度達到95%以上的產品，可直接供糖尿病人服用。特別是粉狀低聚乳果糖產品，貯存、運輸和使用十分方便。

4.產品應用范圍及市場前景（答到應用范圍得2分，答到市場前景得2分）
產品應用范圍廣。a、作為益生素即雙歧桿菌促生素。低聚乳果糖能明顯促進腸道內雙歧桿菌的增長繁殖，抑制腐敗細菌的生長，調整與維持腸道健康；b、作為膳食纖維素，可以有效地降低血清膽固醇和血脂，對因血脂高而引起的高血壓、動脈硬化等有一系列心血管疾病有較好的改善作用；c、作為活化因子即鈣、鎂、鐵等礦物質和微量元素的活化因子，可以達到促進礦物質和微量元素吸收的效果，如在補鈣、鐵、鋅等食品、保健品中添加低聚果糖，可以提向產品的功效；d、作為獨特的低糖、低熱值、難消化的甜味劑，添加於食品中，不僅可以改善產品的口味，降低食品的熱值，而且可以延長產品的貨架期。如在減肥食品中添加低聚果糖，可以極大降低產品熱值；在低糖食品中低聚果糖，較難引起血糖升高；在酒類產品中添加低聚果糖，可以防止酒中內溶物沉澱，改善澄明度，提高酒的風味，使酒的口感更醇厚、更清爽；在果味飲料和茶飲料中添加低聚果糖，可以使產品口味更細膩柔和、更清爽。e、低聚乳果糖還是一種優於抗生素和益生素的新型飼料添加劑；f、低聚乳果糖還可用於葯物、化妝品中。
市場潛力大。a、國際市場：目前日本市場低聚乳果糖年需求量在2500噸以上，以平均售價為800日元/公斤算，年銷售額達到20億日元；隨著低聚乳果糖應用領域的不斷擴展及日本市場、世界市場對低熱值功能性甜味劑的需求不斷增長，低聚乳果糖一直處於供不應求狀態；b、國內市場：我國食品行業中的娃哈哈、光明和樂百氏等著名品牌為提高產品科技含量，已開始關注並參與功能性低聚糖的研製與生產。隨著國內消費者對低聚乳果糖特殊保健功能的認知程度提高，國內消費市場也將啟動，市場前景十分看好。
總之，本研究以蔗糖和乳糖為主要原料生產高純度低聚乳果糖乾粉、濃縮液等，為蔗糖和乳糖的深加工和生產產業鏈的拉長開辟了一條新途徑。在國內外保健食品市場日趨擴大、社會需求日益增加的21世紀，該項目完成後研製出的具有我國自主知識產權的高純度低聚乳果糖發展前景廣闊，經濟效益可觀。

④ 試設計一個實驗分離土壤中的細菌、放線菌、黴菌的純培養

1.分別配細菌、放線菌和黴菌的培養基
2.得到不同濃度土壤溶液,塗布在三種培養基上.
3.從三種培養基上分別挑取單菌落,劃線培養

⑤ 從活性污泥中初步分離和鑒定細菌的主要步驟

從活性污泥中初步分離和建立細菌最主要的步驟是要確定細菌提取的方式和確認細菌的種類，這方面都需要有深刻的研究

⑥ 如何從環境中分離得到厭氧固氮菌（設計試驗）

取少量的土壤在培養基上培養，經過多次分離後得到一些細菌，再接種在另外的培養基上（這個培養基中加碳源、水、無機鹽、不含氮的有機物）在無氧的條件下培養。最後經過多次分離，多次培養，就可以分離得到厭氧固氮菌。

⑦ 細菌分離培養的基本要領和常用方法有哪些

一、基本要領

菌種分離主要在培養皿上進行，常用的方法是稀釋法和劃線法。

菌種分離的目的是是微生物的一個個體通過繁殖，在固體培養基上長出肉眼能見的群體，然後根據培養特徵，用接種針調取所需菌種並在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。

改變培養基條件也有助於菌種分離。沒有一種培養基或一種培養條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養基都是選擇性的。

如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設計特定環境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只佔少數。

二、方法

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然後分別取不同稀釋液少許，與已熔化並冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出現菌落。

如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

2、塗布平板法

因為將微生物懸液先加到較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中常用的純種分離方法是塗布平板法。

其做法是先將已熔化的培養基倒入無菌平皿，製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃塗棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經培養後挑取單個菌落。

3、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。

有時這種單菌落並非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、 稀釋搖管法

用固體培養基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露於空氣中不立即死亡，可以採用通常的方法制備平板，然後置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可採用化學、物理或生物的方法清除。

對於那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可採用稀釋搖管培養法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。

先將一系列盛無菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。

培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一隻滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一隻毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。

(7)實驗設計分離純化養殖尾水的細菌擴展閱讀

在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用於實驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養基分離純化常用的方法。

一般情況下可以通過適當改善培養基的條件來培養特點菌種。

如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進行培養。有時投加相應的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數滴，可以抑制黴菌和細菌的生長，而有利於放線菌的分離。在培養基中投加一定量的青黴素或鏈黴素能抑制細菌的生長，而有利於黴菌的分離。

⑧ 下述微生物的生態環境如何如何設計實驗分離它們嗜熱菌,嗜鹽菌,光合細菌,金

(一)鳴炮慶祝
用品：研缽、玻璃片、滴管、玻棒、紙。
氯酸鉀、紅磷、酒精、漿糊。
原理：氯酸鉀為強氧化劑，紅磷為易燃物，兩者之間很容易發生化學反應。用葯匙將它們相混時會發生燃燒。將混和物撞擊時會發生猛烈的爆炸。
5KClO3＋6P＝5KCl＋3P2O5
操作：將2克氯酸鉀晶體放在研缽里研成粉末，倒在玻璃片上。取0.6克紅磷放在氯酸鉀粉末旁。用滴管吸取酒精滴到兩種葯品上，使葯品潮濕，然後用玻棒將它們混和均勻調成糊狀，分成三等分。等它們乾燥後分別用紙包緊粘牢。
慶祝開始時，把三個紙包先後用力朝水泥地或磚頭上摜，就會發出三聲炮響。
(二)玻棒點火
用品：玻棒、玻璃片、酒精燈。98％濃硫酸、高錳酸鉀。
原理：高錳酸鉀和濃硫酸反應產生氧化能力極強的棕色油狀液體七氧化二錳。它一碰到酒精立即發生強烈的氧化-還原反應，放出的熱量使酒精達到著火點而燃燒。
2KMnO4＋H2SO4＝K2SO4＋Mn2O7＋H2O
2Mn2O7＝4MnO2＋3O2↑
C2H5OH＋3O2→2CO2＋3H2O
操作：用葯匙的小端取少許研細的高錳酸鉀粉末，放在玻璃片上並堆成小堆。將玻棒先蘸一下濃硫酸，再粘一些高錳酸鉀粉末。跟著接觸一下酒精燈的燈芯，燈芯就立即燃燒起來，一次可點燃四、五盞酒精燈。
注意事項：七氧化二錳很不穩定，在0℃時就可分解為二氧化錳和氧氣。因此玻棒蘸濃硫酸和高錳酸鉀後，要立即點燃酒精燈。否則時間一長，七氧化二錳分解完，就點不著酒精燈了。
(三)鋼絲點火
用品：鋼絲、瓶蓋、蠟燭、硫粉。
原理：利用鐵絲上硫燃燒時火焰很淡，白天在遠處看不出來，好象真的是鋼絲把蠟燭點著的。
操作：事先把自行車鋼絲一端錘扁成凹槽，在槽里放一些硫粉，加熱熔化著火，備用。將一支蠟燭點燃後放在桌上。這時用瓶蓋將燭焰蓋滅，再用鋼絲接觸燭芯上升的白煙，燭火便復燃。可再蓋滅，再點燃。這樣一亮一滅，令人暗暗叫奇。
(四)手指點火
用品：研缽、小木板。
蠟燭、氯酸鉀、硫。
原理：蠟燭的余燼使硫燃燒。硫燃燒時放出的熱量使氯酸鉀分解產生氧氣，因而硫燃燒得更旺，余燼便著火了。
操作：取1克氯酸鉀和0.5克硫，分別放在研缽里研成很細的粉末，然後把它們混和均勻。或者用十根火柴，把頭葯刮下研細也行。
在小木板上固定好一支蠟燭，並將它點燃。事先用手指頭蘸些混和好的葯粉。表演時，將燭火吹滅，趁著尚有餘燼，把蘸有葯粉的手指頭，輕輕地向燭芯碰一下，蠟燭便可

⑨ 設計實驗方案分離並區分以下微生物：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酪酸棱菌、金黃色葡萄球菌、釀酒酵母

①原始樣品用無菌水稀釋後，塗布加富培養基平板，一份置於37℃培養：過夜後挑取長出的單菌落進行顯微鏡鏡檢。大腸桿菌,枯草芽胞桿菌，金黃色葡糖球菌屬於細菌，生長速度較快，它們的最適生長溫度在37℃附近。37℃過夜培養後長出的是這三種菌。嗜熱脂肪芽胞桿菌的最適生長溫度不在37℃附近，在此溫度下，應該不長或生長極緩慢。釀酒酵母屬於真菌，菌落形成時間比細菌長。
②將長出的單菌落，分別進行顯微鏡鏡檢細胞形態：大腸桿菌和枯草芽胞桿菌都是桿菌，細胞呈桿狀；金黃色葡糖球菌是球菌，細胞呈球形。
③對桿狀的菌進行革蘭氏染色：大腸桿菌是革蘭氏陰性菌；枯草芽胞桿菌是革蘭氏陽性菌。
④原始樣品用無菌水稀釋後，接種於液體加富培養基中，置於55℃培養過夜培養：嗜熱脂肪芽胞桿菌是嗜熱菌，那麼其最適生長溫度高於55℃（實際最適生長溫度為65℃），在此溫度下長出的菌為嗜熱脂肪芽胞桿菌；為了獲得純培養菌，可以轉接50℃長出的菌種於固體培養基中，45℃（溫度過高，固體瓊脂培養基可能坍塌）培養過夜，挑取單菌落。
⑤原始樣品用無菌水稀釋後，加富培養基中添加15%的乙醇，然後接種樣品，置於30℃培養2~3天。長出的菌為釀酒酵母。釀酒酵母是已知的唯一乙醇濃度可以耐受到15%以上的微生物。根據這個特點將它從樣品中分離。
望採納