1. 用TE稀釋質粒與用超純水稀釋有什麼不一樣的
正如樓上所說,來TE溶液有利於源保證核酸物質的穩定性,但我猜測你想知道其中的道理。我做補充如下:1)T(tris)是弱鹼性,不容易導致核酸水解(DNA在酸性下更易自行水解);2)E(EDTA)可螯合DNA 水解酶的輔酶鎂離子,抑制DNase活性,阻止DNA被酶解。但由於TE(主要是E)對一些 精密實驗 比如酶切 甚至PCR 有負面影響(也作為酶的抑制劑),多使用很稀的TE 如0.1X 的TE作為buffer。
我們實驗室做法:若很短時間就用掉的DNA溶液 就用純水溶解直接做實驗, 此時DNA沒時間降解;若是長時間要保存的 就用10倍稀釋的TE保存成濃的DNA溶液,用前稀釋一下降低EDTA的影響。 供參考,祝順利!
2. 新買的質粒小提盒子中,漂洗液中加的乙醇具體的作用是啥
用
無水乙醇
沉澱DNA,這是實驗中最常用的沉澱DNA的方法。乙醇的優點是可以任意比和水相
混溶
,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理想的
沉澱劑
。
DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易於聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量佔67%左右。
3. 質粒在使用前需要用無核酶水稀釋嗎
只要是純水就可以了,在無金屬離子輔助下,DNA酶一般不起作用。
要沒RNA酶,可能是為了之後的實驗考慮吧。。。
4. 轉染的時候質粒濃度太大用什麼稀釋
你好 請問一些你是用什麼試劑盒提的質粒 用多少洗脫液洗脫的?我是大提質粒之後濃度總是很低,質粒濃縮效果也不理想
5. 轉染質粒用什麼稀釋
規轉染技術兩類類瞬轉染類穩定轉染(永久轉染)前者外源DNA/RNA整合宿主染色體宿主細胞存拷貝數產高水平表達通持續幾用於啟其調控元件析般說超螺旋質粒DNA轉染效率較高轉染24-72內(依賴於各種同構建)析結用些報告系統熒光蛋白β半乳糖苷酶等幫助檢測者稱穩定轉染外源DNA既整合宿主染色體能作種游離體(episome)存盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低整合率高外源DNA整合染色體概率約1/104轉染細胞能整合通需要通些選擇性標記氨丙基轉移酶(APH;新黴素抗性基)潮黴素B磷酸轉移酶(HPH)胸苷激酶(TK)等反復篩選穩定轉染同源細胞系
建議多看看書
別人的只能參考,沒有意義
6. 用TE稀釋質粒與用超純水稀釋有什麼不一樣的
和ddH2O相比,TE溶液有利於保證核酸物質的穩定性,便於長時間的保存。個人經驗:TE配置不合格的話會影響下游的一些操作,一般都是直接用ddH2O。
7. 微生物培養可以用超純水嗎
微生物培養可以用超純水,但不適合。
純凈水不適合用來培養微生物,因為微生物生存 需要生命必須物質, 純凈水指的是不含雜質的水,簡稱凈水或純水,是純潔、干凈,不含有雜質或細菌的水,如有機污染物、無機鹽、任何添加劑和各類雜質,是以符合生活飲用水衛生標準的水為原水。
通過電滲析器法、離子交換器法、反滲透法、蒸餾法及其他適當的加工方法製得而成,密封於容器內,且不含任何添加物,無色透明,可直接飲用。
簡介:
1、平板劃線法。
通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在數次劃線後培養,可以分離到由一個細胞繁殖而來的菌落。
2、稀釋塗布平板法。
將菌液進行一系列的梯度稀釋,然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面,進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞,從而能在培養基表面形成單個的菌落。
8. 合成的引物該怎麼處理,用超純水還是什麼稀釋
如果短期內不用,不開管-20度保存就行,開管了,用超純水稀釋就可以,一般按照說明書稀釋就行,稀釋後-20度保存,我用的-20度保存5年還能用,不過沒評價效果降低到什麼程度
9. pcr用超純水
最好還是在冰上做啦,一次兩次沒有問題,久了多了可能問題就出來了
一般用的是滅菌的雙蒸水
保證引物的終濃度就可以.都是用水稀釋的,沒啥差別
10. 我從國外要回的質粒,有誰知道下一步該怎麼處理擴增啊請寫具體一點,試劑都用多少,我還沒做過實驗呢。
這個時候一般是先制備感受態的大腸桿菌,一般是用CaCl2處理,現在也有商品化的感受態,一般菌株為DH5α。具體制備方法搜一下「感受態細胞制備」就有。
然後一般取50-100ng質粒加入100ul的感受態細胞里,進行熱激處理,這個操作方法網上也有,一般是感受態細胞(-70°C取出才有這一步)冰上融化,加入質粒,42℃保溫90s,冰上放置5min。
然後加入400ul LB培養基,37℃振盪培養0.5-1h(時間不要超過2h)。 取100ul培養液在固體培養基(LB固體培養基,一個平板里大概30ml)上進行塗布(培養基需帶有質粒上相應的抗生素)。
培養12-24h後,可以挑單克隆(多挑幾個),在5mlLB培養基中培養過夜(16h左右),留1ml保存菌種(方法具體自己查一下),其餘的抽提質粒,5ml過夜培養液一般多拷貝質粒的話至少可以抽到10-20ug左右。
希望對你有幫助~都是自己實驗過程中的經驗~