純凈水指的是不含雜質的H2O，簡稱凈水或純水，是純潔、干凈，不含有雜質或細菌的水，如有機污染物、無機鹽、任何添加劑和各類雜質，是以符合生活飲用水衛生標準的水為原水。
蒸餾水就是將水蒸餾、冷凝的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。低耗氧量的水，加入高錳酸鉀與酸工業蒸餾水是採用蒸餾水方法取得。（簡單地說就是水沸騰後液化成的小水滴）
蒸飯，蒸包子時鍋蓋上的水珠都是蒸餾水。
❷ 生物製品論文,各位大俠幫幫忙,每篇要3000到5000字,題目如下:
細胞培養的基本原理與技術
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫葯領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程葯物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程中更是離不細胞培養，雜交瘤單克隆抗體，完全是通過細胞培養來實現的，既使是現在飛速發展的基因工程抗體也離不開細胞培養。正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經過細胞培養過程才能實現，發酵工程和酶工程有的也與細胞培養密切相關。總之，細胞培養在整個生物技術產業的發展中起到了很關鍵的核心作用。
第一節 體外培養的概念
一、基本概念 體外培養（in vitro culture），就是將活體結構成分或活的個體從體內或其寄生體內取出，放在類似於體內生存環境的體外環境中，讓其生長和發育的方法。
●組織培養：是指從生物體內取出活的組織（多指組織塊）在體外進行培養的方法。
●細胞培養：是指將活細胞（尤其是分散的細胞）在體外進行培養的方法。
●器官培養：是指從生物體內取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在體外進行培養的方法。
二、體內、外細胞的差異和分化
1.差異：細胞離體後，失去了神經體液的調節和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態平衡相對穩定環境中，日久天長，易發生如下變化：分化現象減弱；形態功能趨於單一化或生存一定時間後衰退死亡；或發生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此，培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同於體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置於體外培養後，這種差異就開始發生了。
2.分化：體外培養的細胞分化能力並未完全喪失，只是環境的改變，細胞分化的表現和在體內不同。細胞是否表現分化,關鍵在於是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養時能長成血管狀結構，雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體，這些均屬於細胞分化行為。
第二節 細胞培養的一般過程
一、准備工作 准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。
二、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。
理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。
原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。
四、凍存及復甦 為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作台,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恆溫培養箱,培養器具，CO2培養箱,恆溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術儀等等。
第三節 細胞培養的無菌環境
一、無菌室
無菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。
無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態，經常消毒是必要的，通常採用每日（使用前）紫外照射（1－2小時），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和牆壁一次的方式進行消毒。實際工作中，要根據無菌室建築材料的差異來選擇合適的消毒方法。
此外，還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風沒有被過濾除菌；進出無菌室時，能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間；等。
二、超凈工作台
工作原理：鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過檯面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區構成無菌環境。根據氣流在超凈工作台的流動方向不同，可將超凈工作台分為側流式、直流式和外流式三種類型。
超凈台的使用與保養：超凈台的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過大、過小均不利於保持凈化度；使用前最好開啟超凈台內紫外燈照射10－30分鍾，然後讓超凈台預工作10－15分鍾，以除去臭氧和使用工作檯面空間呈凈化狀態；使用完畢後，要用70%酒精將檯面和台內四周擦拭乾凈，以保證超凈台無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈台。
第四節 常用培養器皿及清洗消毒
細胞培養需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠製品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識，學會清洗、消毒方法是從事細胞培養工作必須的。
一、清洗 離體條件下，有害物質直接同細胞接觸，細胞對任何有害物質十分敏感，極少殘留物都可以對細胞產生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認真清洗，達到不含任何殘留物的要求。
（一）玻璃器皿的清洗 一般經過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個步驟。
1.浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗，然後用5％鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂，乾涸後不易刷洗掉，故用後應立即浸入清水中備刷洗。
2.刷洗:將浸泡後的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復刷洗。不要留死角，並防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾乾，備浸酸。
3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質。浸酸不應少於六小時，一般過夜或更長。放取器皿要小心。
4.沖洗:刷洗和浸酸後的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸後器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細胞培養的成敗。手工洗滌浸酸後的器皿，每件器皿至少要反復「注水－倒空」15次以上，最後用重蒸水浸洗2－3次，晾乾或烘乾後包裝備用。
（二）橡膠製品清洗
新的橡膠製品洗滌方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分鍾，流水沖洗，0.5mol/L HCl煮沸15分鍾，流水沖洗，自來水煮沸2次，蒸餾水煮沸20分鍾，50℃烤乾備用。
（三）塑料製品的清洗
塑料製品特點：質軟、易出現劃痕；耐腐蝕能力強、但不耐熱。
清洗程序：使用器皿後立即用清水清洗，浸於自來水過夜，用紗布或棉簽和50℃清洗液刷洗，流水沖洗，晾乾，浸於清潔液15分鍾，流水沖洗（15－20遍）,蒸餾水浸洗三次，雙蒸水泡24小時，晾乾備用。
（四）包裝:對細胞培養用品進行消毒前，要進行嚴密包裝，以便於消毒和貯存。常用的包裝材料：牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、較大培養皿等，近幾年用鋁箔包裝，非常方便，適用。培養皿、注射器、金屬器械等用牛皮紙包裝後再裝入飯盒內，較大的器皿可以進行局部包紮。
二、消毒和滅菌 微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因
（一）物理消毒法
1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力最強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒，用法簡單，效果好。
紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間，每天照射2－3小時，期間可間隔30分鍾。燈管離地面2米以外要延長照射時間，2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作台的距離不應超過1.5米，照射時間30分鍾為宜。
紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害，且對培養細胞與試劑等也產生不良影響，因此，不要開著紫外等操作。
2.高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白質變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養液都可以用這方法滅菌。
不同壓力蒸汽所達到的溫度不同，不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液體），應立即放到60-70℃烤箱內烘乾，再貯存備用，否則，潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法，它具有條件簡單、使用方便等特點。
3.高溫乾熱消毒:乾熱滅菌主要是將電熱烤箱內物品加熱到160℃以上，並保持90－120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的。主要用於滅菌玻璃器皿（如體積較大的燒杯、培養瓶）、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品（如粉劑、油劑）。
乾熱滅菌後要關掉開關並使物品逐漸冷卻後在打開，切忌立即打開，以免溫度驟變而使箱內的玻璃器皿破裂。干烤箱內物品間要有空隙，物品不要靠近加熱裝置。
燒灼也是滅菌方法之一，常利用檯面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒。
4.過濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過濾，使大於孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌目的。在體外培養時，過濾除菌大多用於遇熱容易變性而失效的試劑或培養液。目前，大多實驗室採用微孔濾膜濾器除菌。關鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。
（二）化學消毒：新潔而滅，其0.1％水溶液可對器械、皮膚、操作表面進行擦拭和浸泡消毒。
（三）抗生素消毒：抗生素主要用於消毒培養液，是培養過程中預防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴重時的「急救」方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應根據需要選擇。
可用於細胞培養的消毒滅菌方法很多，但每種方法都有一定的適應范圍。如常用的過濾除菌系統、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實驗室空氣；多用新潔而滅消毒實驗室地面；常用乾熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養用器皿；採用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養液。
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❺ 分子生物學體外細胞培養具體操作過程和注意事項
一、准備工作 准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。
二、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。
理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。
原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。
四、凍存及復甦 為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作台,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恆溫培養箱,培養器具，CO2培養箱,恆溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術儀等等。
❻ 求分子生物學實驗講義
【實驗目的】
（1）了解實驗的常規儀器、設備、耗材。
（2）掌握本實驗所用儀器的功能和使用方法。
【實驗內容】
一、驗室的常規儀器、設備
(一) 溫度控制系統：
1. 冰箱: 根據葯品、試劑及多種生物制劑保存的需要，必須具備不同控溫級別的冰箱，最常使用的有：4℃、-20℃、-80℃冰箱。
4℃適合儲存某些溶液、試劑、葯品等。
-20℃適用於某些試劑、葯品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白質樣品等。
-80℃適合某些長期低溫保存的樣品、純化的樣品、特殊的低溫處理消化液等的保存。
0-10℃的冷櫃適合低溫條件下的電泳、層析、透析等實驗。
2．液氮罐：有些實驗材料、某些器官組織、細胞株、菌株及純化的樣品等，要求速凍和長期保存在超低溫環境下，就需要一個液氮罐（-196℃）具有經濟、省力和較好地保持細胞生物學特性的優點。
3．培養箱：37℃恆溫箱用於細菌的固體培養和細胞培養。
CO2培養箱適用於培養各種細胞，可恆定地提供一定量的CO2（通常5%），用來維持培養液的酸度（pH值）。
37℃恆溫空氣搖床可進行液體細菌的培養。
4. 水浴鍋：用於保溫。
25-100℃水浴搖床可用於分子雜交試驗，各種生物化學酶反應等試驗的保溫。
25-100℃水浴箱用於常規試驗。
5. 烘箱：主用於烘乾實驗器皿，有些需要溫度高些，有些需要溫度低些。用於RNA方面的實驗用具，需要在250℃烤箱中烘乾，有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘乾。
（二）水的凈化裝置：隨著分子生物學的飛速發展，許多實驗對水純度的要求越來越高。
1. 蒸餾水皿：單蒸水常難以滿足實驗要求。雙蒸水、三蒸水配液，許多實驗要去離子水。
多次蒸餾水可除去水中揮發性雜質，不能完全除去水中溶解的氣體雜質（Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ)）。
2. 離子交換器：去離子水—用離子交換法製取的水，稱去離子水。
去離子效果好，但不能除去水中的非離子型雜質，其中常含有微量的有機物（樹脂等）。
1
3．超純水：用蒸餾水、離子交換水、反滲透純水做為供水，磁鐵耦合齒輪泵作用使水循環。用於PCR、PCR氨基酸分析、DNA測序、酶反應、組織和細胞培養等。
（三）菌消毒設備：分子生物學所用大部分試劑，而且實驗用具都應嚴格消毒滅菌。。
1．蒸汽消毒鍋：用於小批量物品的隨時消毒。大批實驗物品、試劑、培養基可使用大型消毒且定時進行消毒
2. 紫外線：75%乙醇 、0.1%SDS（消毒劑）
一些耐高壓、高溫消毒且可用紫外線照射或乙醇和SDS浸泡。
紫外線照射使用方便，且很方便，但滅菌效果與距離有關，且產生臭氧污染安全，用於無菌室，超凈台和塑料用具的消毒。
3. 濾器濾膜：不耐高溫、高壓的試劑用其處菌。
4. 煮沸消毒：主用於金屬器械和針急需時採用。
（四） 計量系統：
1. 稱量系統：（各種天平）台秤、托盤天平、鈕力擺動天平、
光電分子天平、精密電子分析天平
2. 液體體積的度量：精：量筒、移液管、微量取液器
粗：刻度試管、燒杯、錐形瓶
3. pH值測量：
pH計：測定溶液中H+的直接電位的儀器，主要通過一對電極，在不同的pH溶液中產生不同的電動勢用pH值表示出來。
pH試紙：只適用於培養液、酚飽和液、緩沖液或其它試劑溶液的pH值的粗略估計。而大部分試劑的配製要求嚴格的pH值，需精確度高（小數點後兩位）的pH計。
4. OD值測量：光密度、分光光度計是利用物質在可見光和紫外線區域中的吸收光譜來鑒定該物質的性質及其含量的一種儀器。它是由光源、單色器、吸收池、接收器、測量儀表或顯示屏幕所組成。OD值是許多溶液中溶質定量的方便指標之一，通過所產生的單色光而測定某一溶液對該單色光的吸收值，利用它可進行核酸溶液定量和純度的初步判斷。
（五）離心機：離心技術是研究生物的結構和功能中不可缺少的一種物理技術手段。因為各種物質在沉澱系數、浮力、和質量等方面有差異，可利用強大的離心力場，使其分離、純化和濃縮。目前有各種各樣的離心機。可供少於0.05ml到幾升的樣品離心之用。離心技術應用廣泛，包括收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。據其轉速的不同，可分為以下幾種類型：
1. 普通離心機：最大轉速6000 r/m ，最大離心力6000g
①醫用或台式離心機：是離心機中最簡單而廉價的，最常用於收集快速沉降系數的物質，如紅細胞、粗大的沉澱物、酵母菌和細菌等。
②低速冷凍離心機：主要用於細胞、細胞核、細胞膜和細菌的沉澱和收集等。 2
2. 高速離心機：最大轉速25000 r/m ，最大離心力89000g
有冷凍和常溫兩種，多用於制備和手收集微生物、細胞碎片、細胞、大的細胞器、硫酸銨沉澱物以及免疫沉澱物等。
3. 超速離心機：最大轉速9000 r/m ，最大離心力694000g。
4. 台式超速離心機：最大轉速12000r/m ，最大離心力625000g。
（六）超凈工作台：內有紫外燈、照明燈、還應有酒精燈火焰、75%乙醇等滅菌的設備，是一種提供局部潔凈度的設備。其原理是鼓風機驅動空氣，經過低、中效的過濾器後，通過工作檯面，使實驗操作區域成為無菌的環境。超凈台按氣流方向的不同大致有幾種類型：
①側流式：凈化後氣流，從左側或右側通過工作檯面，流向對側，或者從上往下或從下往上流向對側，他們都能形成氣流屏障而保障檯面無菌。
缺點：在凈化氣流和外邊氣體交界處，可因氣體的流向而出現負壓，使少量的未凈化氣體混入，而造成污染。
②外流式：氣流是面向操作人員的方向流動，從而保證外面氣體不能混入。
缺點：在進行有害物質實驗時，對操作人員不利，但可採用有機玻璃把上半部分遮擋起來，使氣流往下方流出。（七）電泳系統：電泳技術是檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特徵，甚至還是分離、純化、回收和濃縮樣品的工具之一。核酸和蛋白質等都帶有電荷，當它們被置於電場中時，能夠移動。
電泳裝置由兩部分組成：電源裝置和電泳槽裝置。
① 電泳裝置：電源需經穩流通過穩壓器，既能提供穩定的直流電，又能輸出穩定的電壓。可用於三種：
常度穩壓電泳儀：輸出電壓0-500v 0-15mA
中度穩壓電泳儀：輸出電壓400-1000v
高度穩壓電泳儀：輸出電壓1000以上的電源裝置。
② 電泳槽裝置：分兩種
水平式電泳槽：一般分為微型電泳槽和大號水平式電泳槽
垂直式電泳槽：分垂直平板電泳槽和圓柱形電泳槽裝置。
（八）PCR儀：Polymerase Chain Reaction儀，也稱DNA熱循環儀，基因擴增，它是使一對寡核苷酸引物結合到正負DNA鏈上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環包括在三種不同溫度進行的DNA變性，引物復性，DNA聚合酶催化的延伸反應三個過程。
（九）凝膠成像分析系統:
對電泳後含溴乙錠（EB）核酸樣品的觀察分析。
（十）乾燥設備： 3
1. 真空加熱乾燥箱：核酸在硝酸纖維素膜和尼龍膜上固定，用於雜交實驗。
2. 電泳凝膠乾燥箱：電泳後的凝膠進行脫水乾燥的儀器，一般可將凝膠乾燥到一些玻璃紙上，乾燥後的凝膠易於保存。
3. 液氮冷凍乾燥：適用於活性蛋白質樣品的乾燥與結晶。
4. 真空泵：許多實驗都需要抽真空。如：乙醇沉澱後核酸樣品的乾燥，電泳凝膠的乾燥等。
（十一） 其他
1. 微波爐：便於一些溶液的快速加熱和定溫加熱，電泳瓊脂糖凝膠配製、溶化等。
2. 製冰機：用於製造大多數核酸、蛋白質的實驗操作所需的低溫環境，以減少核酸酶或蛋白質酶的水解。
3. 層析裝置：（色譜分離）是一種分離多組分混合物的有效物理方法。
真空印記系統，DNA合成/測序儀：這些都是對核酸進行深入研究的必備儀器。
4. 磁力攪拌器：多角度旋轉混勻器、快速振盪混合器：用於混合儀器。
5. 組織勻漿器：超聲組織及細胞破碎器，用其進行樣品的分離提純實驗。
6. 通風櫥：很多溶劑能逸出毒氣，必備櫃 ，放射性試驗還要有有機玻璃屏蔽。
7. 玻璃蒸餾器、電熱加帽、變壓器：用於酚等有機溶劑的蒸餾。
8. Tip頭、Eppendorf管：
微管移液器tip頭（吸液尖）、Eppendorf管（微量離心管）可洗滌，硅化消毒後反復使用。對一些要求嚴格的實驗，如RNA的提取、保存等操作，應使用新的消毒tip頭與Eppendorf管。另外還應備有常用規格的離心管（1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等）及96孔、24孔、12孔、6孔的細胞培養塑料平板等。
9. 小型設備、用具：
定時器、濾膜、保鮮膜、防護眼鏡鴨嘴鑷、常規的玻璃或塑料器皿（包括平皿、試管、燒杯、量瓶、試劑分液漏斗、避光保存的試劑應使用棕色試劑瓶，如飽和酚、巰基乙醇等）、記號筆、各種手套PE、乳膠、家用、防酸的等）
二、本期實驗所用主要儀器、 設備的功能及操作
1. 酚的重蒸餾裝置：空氣冷凝式玻璃蒸餾器。
一般酚是無色透明的結晶，如呈粉色或黃色，表明其中含有酚的氧化產物，如醌、二酸等，變色的酚不能用於實驗，因其中的酚氧化物可破壞核酸的磷酸二酯鍵，並引起DNA鏈的交聯。使用前必須在160℃-180℃重蒸餾以去除能引起RNA和DNA斷裂和交聯的污染雜質，從而得到純凈的酚。
2. 磁力攪拌器：81-2型恆溫磁力攪拌器
將導電溫度表用導線與二芯插頭連接，插入後面的溫度表孔內，當溫度上升到預先調整好的度數時即自動停止加熱（控溫攪拌）。主要用於物質的快速攪拌、溶解和混勻。如配製試劑，制備酚的水飽和液等。 4
3. 蒸餾水器：1810B自動雙重純水蒸餾器，石英管加熱式，本器的一次及二次蒸餾均有保護裝置，使用安全可靠，熱繼電器當冷卻水突然中斷或缺水的情況下，即自動切斷電源。干簧繼電器控制二次蒸餾瓶內的水位，其高度應以在水位降低時能自動切斷電源為准，從而達到自動控制水位的目的。
該儀器主要用於制備雙蒸水和三蒸水。
4. 離心機：TGL-16G台式高速離心機，最大轉速20000rpm，主要用於核酸提取時蛋白質的沉澱和有機相與水相的分層，PCR檢測的瞬時離心。
5. 微量取液器：主要用於精確量取微量液體體積和核酸水相的轉移。
6. 勻漿器：5ml、10ml玻璃勻漿器。
主用於組織細胞的破碎。
7. 凝膠成像分析系統
主用於核酸樣品瓊脂糖凝膠和PCR電泳結果的紫外觀察和照像。
8. PCR儀：PTC-200基因擴增儀
體外擴增核酸的儀器
9. 蒸汽消毒鍋：用於實驗用試劑、器皿、用具等的滅菌清毒
有電加熱式、電爐加熱式兩種。
10. 超凈台：JJT-1300型潔凈工作台，側流式。
原理：吸進氣經過初、中級過濾皿（無紡布濾過）後，再通過風機經高級過濾器（超細玻璃纖維濾紙製成）而形成潔凈空氣。主要是在局部空氣造成潔凈空氣環境，以使工作區域中的懸浮粒子及微生物控制在最低限度內。
本台操作壓為垂直層流壓，因此出風面與操作位置不應放置多餘的物品，以免妨礙氣流的正常流動，影響潔凈度，檯面板上的孔作為通風孔，使用時避免有液體或其他物品漏入空中，以免影響內部構件。風速可調。
使用：75%乙醇消毒2-3次，擺放好實驗用品。插上電源，紫外消毒30分鍾，啟動風機5m後關燈，關燈後10分鍾打開照明燈，即可使用。
11. 電泳系統：
①電泳儀：HV-3000型高度三恆多用電泳儀（恆壓、恆流、恆功率）
②電泳槽：水平式兩種。
12．微波爐：主要用於瓊脂糖的快速溶解。
❼ 自動三重純水蒸餾器、我想購買西安常儀儀器設備有限公司的自動三重純水蒸餾器，請問要辦哪些手續
是的，要合同可以給對方有一些約束力。合同可要也可不要，信譽度高的公司不要合同也罷。要問一下供方的供貨期時間是多長。
❽ 建立一個細胞系需要做哪些生物學檢驗
第一章 細胞培養的基本原理與技術
現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術，而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系，特別是在醫葯領域的發展，細胞培養更具有特殊的作用和價值。比如基因工程葯物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程中更是離不細胞培養，雜交瘤單克隆抗體，完全是通過細胞培養來實現的，既使是現在飛速發展的基因工程抗體也離不開細胞培養。正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經過細胞培養過程才能實現，發酵工程和酶工程有的也與細胞培養密切相關。總之，細胞培養在整個生物技術產業的發展中起到了很關鍵的核心作用。
第一節 體外培養的概念
一、基本概念 體外培養（in vitro culture），就是將活體結構成分或活的個體從體內或其寄生體內取出，放在類似於體內生存環境的體外環境中，讓其生長和發育的方法。
●組織培養：是指從生物體內取出活的組織（多指組織塊）在體外進行培養的方法。
●細胞培養：是指將活細胞（尤其是分散的細胞）在體外進行培養的方法。
●器官培養：是指從生物體內取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在體外進行培養的方法。
二、體內、外細胞的差異和分化
1.差異：細胞離體後，失去了神經體液的調節和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態平衡相對穩定環境中，日久天長，易發生如下變化：分化現象減弱；形態功能趨於單一化或生存一定時間後衰退死亡；或發生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此，培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同於體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置於體外培養後，這種差異就開始發生了。
2.分化：體外培養的細胞分化能力並未完全喪失，只是環境的改變，細胞分化的表現和在體內不同。細胞是否表現分化,關鍵在於是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養時能長成血管狀結構，雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體，這些均屬於細胞分化行為。
第二節 細胞培養的一般過程
一、准備工作 准備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒，培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌，無菌室或超凈台的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。
二、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。
理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。取材後應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。
原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。
四、凍存及復甦（可參閱後面有關章節）為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存於液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復甦一般採用快融方法，即從液氮中取出凍存管後，立即放入37℃水中，使之在一分鍾內迅速融解。然後將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作台,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恆溫培養箱,培養器具，CO2培養箱,恆溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術儀等等。
第三節 細胞培養的無菌環境
一、無菌室
無菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成。
無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態，經常消毒是必要的，通常採用每日（使用前）紫外照射（1－2小時），每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和牆壁一次的方式進行消毒。實際工作中，要根據無菌室建築材料的差異來選擇合適的消毒方法。
此外，還應注意防止無菌室的污染。造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風沒有被過濾除菌；進出無菌室時，能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間；等。
二、超凈工作台
工作原理：鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化，凈化的空氣被徐徐吹過檯面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走，使工作區構成無菌環境。根據氣流在超凈工作台的流動方向不同，可將超凈工作台分為側流式、直流式和外流式三種類型。
超凈台的使用與保養：超凈台的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜，過大、過小均不利於保持凈化度；使用前最好開啟超凈台內紫外燈照射10－30分鍾，然後讓超凈台預工作10－15分鍾，以除去臭氧和使用工作檯面空間呈凈化狀態；使用完畢後，要用70%酒精將檯面和台內四周擦拭乾凈，以保證超凈台無菌。還要定期用福爾馬林熏蒸超凈台。
第四節 常用培養器皿及清洗消毒
細胞培養需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠製品、布類、紙類等，因此掌握清洗、消毒知識，學會清洗、消毒方法是從事細胞培養工作必須的。
一、清洗 離體條件下，有害物質直接同細胞接觸，細胞對任何有害物質十分敏感，極少殘留物都可以對細胞產生毒副作用。因此，新的或重新使用的器皿都必須認真清洗，達到不含任何殘留物的要求。
（一）玻璃器皿的清洗 一般經過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個步驟。
1.浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗，然後用5％鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂，乾涸後不易刷洗掉，故用後應立即浸入清水中備刷洗。
2.刷洗:將浸泡後的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復刷洗。不要留死角，並防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾乾，備浸酸。
3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質。浸酸不應少於六小時，一般過夜或更長。放取器皿要小心。
4.沖洗:刷洗和浸酸後的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸後器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細胞培養的成敗。手工洗滌浸酸後的器皿，每件器皿至少要反復「注水－倒空」15次以上，最後用重蒸水浸洗2－3次，晾乾或烘乾後包裝備用。
（二）橡膠製品清洗
新的橡膠製品洗滌方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分鍾，流水沖洗，0.5mol/L HCl煮沸15分鍾，流水沖洗，自來水煮沸2次，蒸餾水煮沸20分鍾，50℃烤乾備用。
（三）塑料製品的清洗
塑料製品特點：質軟、易出現劃痕；耐腐蝕能力強、但不耐熱。
清洗程序：使用器皿後立即用清水清洗，浸於自來水過夜，用紗布或棉簽和50℃清洗液刷洗，流水沖洗，晾乾，浸於清潔液15分鍾，流水沖洗（15－20遍）,蒸餾水浸洗三次，雙蒸水泡24小時，晾乾備用。
（四）包裝:對細胞培養用品進行消毒前，要進行嚴密包裝，以便於消毒和貯存。常用的包裝材料：牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、較大培養皿等，近幾年用鋁箔包裝，非常方便，適用。培養皿、注射器、金屬器械等用牛皮紙包裝後再裝入飯盒內，較大的器皿可以進行局部包紮。
二、消毒和滅菌 微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因
（一）物理消毒法
1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力最強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒，用法簡單，效果好。
紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間，每天照射2－3小時，期間可間隔30分鍾。燈管離地面2米以外要延長照射時間，2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作台的距離不應超過1.5米，照射時間30分鍾為宜。
紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害，且對培養細胞與試劑等也產生不良影響，因此，不要開著紫外等操作。
2.高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白質變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養液都可以用這方法滅菌。
不同壓力蒸汽所達到的溫度不同，不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液體），應立即放到60-70℃烤箱內烘乾，再貯存備用，否則，潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法，它具有條件簡單、使用方便等特點。
3.高溫乾熱消毒:乾熱滅菌主要是將電熱烤箱內物品加熱到160℃以上，並保持90－120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的。主要用於滅菌玻璃器皿（如體積較大的燒杯、培養瓶）、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品（如粉劑、油劑）。
乾熱滅菌後要關掉開關並使物品逐漸冷卻後在打開，切忌立即打開，以免溫度驟變而使箱內的玻璃器皿破裂。干烤箱內物品間要有空隙，物品不要*近加熱裝置。
燒灼也是滅菌方法之一，常利用檯面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒。
4.過濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過濾，使大於孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌目的。在體外培養時，過濾除菌大多用於遇熱容易變性而失效的試劑或培養液。目前，大多實驗室採用微孔濾膜濾器除菌。關鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。
（二）化學消毒：新潔而滅，其0.1％水溶液可對器械、皮膚、操作表面進行擦拭和浸泡消毒。
（三）抗生素消毒：抗生素主要用於消毒培養液，是培養過程中預防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴重時的「急救」方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應根據需要選擇。
可用於細胞培養的消毒滅菌方法很多，但每種方法都有一定的適應范圍。如常用的過濾除菌系統、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實驗室空氣；多用新潔而滅消毒實驗室地面；常用乾熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養用器皿；採用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養液。
❾ 三個細胞系在生物學表現上是否有差異
第一章 細胞培養的基本原理與技術 現代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發酵工程技術,而這些技術的發展幾乎都與細胞培養有密切關系,特別是在醫葯領域的發展,細胞培養更具有特殊的作用和價值.比如基因工程葯物或疫苗在研究生產過程中很多是通過細胞培養來實現的.基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體；細胞工程中更是離不細胞培養,雜交瘤單克隆抗體,完全是通過細胞培養來實現的,既使是現在飛速發展的基因工程抗體也離不開細胞培養.正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經過細胞培養過程才能實現,發酵工程和酶工程有的也與細胞培養密切相關.總之,細胞培養在整個生物技術產業的發展中起到了很關鍵的核心作用. 第一節 體外培養的概念 一、基本概念 體外培養（in vitro culture）,就是將活體結構成分或活的個體從體內或其寄生體內取出,放在類似於體內生存環境的體外環境中,讓其生長和發育的方法. ●組織培養：是指從生物體內取出活的組織（多指組織塊）在體外進行培養的方法. ●細胞培養：是指將活細胞（尤其是分散的細胞）在體外進行培養的方法. ●器官培養：是指從生物體內取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在體外進行培養的方法. 二、體內、外細胞的差異和分化 1.差異：細胞離體後,失去了神經體液的調節和細胞間的相互影響,生活在缺乏動態平衡相對穩定環境中,日久天長,易發生如下變化：分化現象減弱；形態功能趨於單一化或生存一定時間後衰退死亡；或發生轉化獲得不死性,變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系.因此,培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體,它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能,也有一些不同於體內細胞的性狀.實際上從細胞一旦被置於體外培養後,這種差異就開始發生了. 2.分化：體外培養的細胞分化能力並未完全喪失,只是環境的改變,細胞分化的表現和在體內不同.細胞是否表現分化,關鍵在於是否存在使細胞分化的條件,如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養時能長成血管狀結構,雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體,這些均屬於細胞分化行為. 第二節 細胞培養的一般過程 一、准備工作 准備工作對開展細胞培養異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行.准備工作的內容包括器皿的清洗、乾燥與消毒,培養基與其他試劑的配製、分裝及滅菌,無菌室或超凈台的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試. 二、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定）,經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）後接入培養器血中,這一過程稱為取材.如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程.機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養. 理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用於培養,實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養,分化程度低的組織比分化高的容易培養,腫瘤組織比正常組織容易培養.取材後應立即處理,盡快培養,因故不能馬上培養時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養液中保存.取組織時應嚴格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質.取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理. 三、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養.如系組織塊培養,則直接將組織塊接入培養器皿底部,幾個小時後組織塊可貼牢在底部,再加入培養基.如系細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿並直接加入培養基.細胞進入培養器皿後,立即放入培養箱中,使細胞盡早進入生長狀態. 正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察的內容包括細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH是否太酸或太鹼（由酚紅指示劑指示）,此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查. 原代培養一般有一段潛伏期（數小時到數十天不等）,在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和遊走.過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期.細胞長滿瓶底後要進行傳代培養,將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養.每傳代一次稱為「一代」.二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去.轉化細胞可能具有惡性性質,也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性. 四、凍存及復甦（可參閱後面有關章節）為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存.凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞碸或甘油）的培養基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存於液氮中.在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的.復甦一般採用快融方法,即從液氮中取出凍存管後,立即放入37℃水中,使之在一分鍾內迅速融解.然後將細胞轉入培養器皿中進行培養. 凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復甦時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響. 五、常用儀器設備 無菌室,超凈工作台,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恆溫培養箱,培養器具,CO2培養箱,恆溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無菌過濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術儀等等. 第三節 細胞培養的無菌環境 一、無菌室 無菌室的結構：一般由更衣間、緩沖間、操作間三部分組成. 無菌室的消毒和防污染：為保持無菌狀態,經常消毒是必要的,通常採用每日（使用前）紫外照射（1－2小時）,每周甲醛、乳酸、過氧乙酸熏蒸（2小時）和每月新潔爾滅擦拭地面和牆壁一次的方式進行消毒.實際工作中,要根據無菌室建築材料的差異來選擇合適的消毒方法. 此外,還應注意防止無菌室的污染.造成無菌室污染的可能包括：送入無菌室的風沒有被過濾除菌；進出無菌室時,能使外界空氣直接對流進無菌室的操作間；等. 二、超凈工作台 工作原理：鼓風機驅動空氣通過高效過濾器得以凈化,凈化的空氣被徐徐吹過檯面空間而將其中的塵埃、細菌甚至病毒顆粒帶走,使工作區構成無菌環境.根據氣流在超凈工作台的流動方向不同,可將超凈工作台分為側流式、直流式和外流式三種類型. 超凈台的使用與保養：超凈台的平均風速保持在0.32-0.48米/秒為宜,過大、過小均不利於保持凈化度；使用前最好開啟超凈台內紫外燈照射10－30分鍾,然後讓超凈台預工作10－15分鍾,以除去臭氧和使用工作檯面空間呈凈化狀態；使用完畢後,要用70%酒精將檯面和台內四周擦拭乾凈,以保證超凈台無菌.還要定期用福爾馬林熏蒸超凈台. 第四節 常用培養器皿及清洗消毒 細胞培養需要大量消耗性物品,如玻璃器皿、金屬器皿、塑料、橡膠製品、布類、紙類等,因此掌握清洗、消毒知識,學會清洗、消毒方法是從事細胞培養工作必須的. 一、清洗 離體條件下,有害物質直接同細胞接觸,細胞對任何有害物質十分敏感,極少殘留物都可以對細胞產生毒副作用.因此,新的或重新使用的器皿都必須認真清洗,達到不含任何殘留物的要求. （一）玻璃器皿的清洗 一般經過浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四個步驟. 1.浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡,軟化和溶解附著物.新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗,然後用5％鹽酸浸泡過夜；用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂,乾涸後不易刷洗掉,故用後應立即浸入清水中備刷洗. 2.刷洗:將浸泡後的玻璃器皿放到洗滌劑水中,用軟毛刷反復刷洗.不要留死角,並防止破壞器皿表面的光潔度.將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾乾,備浸酸. 3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中,又稱酸液,通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質.浸酸不應少於六小時,一般過夜或更長.放取器皿要小心. 4.沖洗:刷洗和浸酸後的器皿都必須用水充分沖洗,浸酸後器皿是否沖洗的干凈,直接影響到細胞培養的成敗.手工洗滌浸酸後的器皿,每件器皿至少要反復「注水－倒空」15次以上,最後用重蒸水浸洗2－3次,晾乾或烘乾後包裝備用. （二）橡膠製品清洗 新的橡膠製品洗滌方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分鍾,流水沖洗,0.5mol/L HCl煮沸15分鍾,流水沖洗,自來水煮沸2次,蒸餾水煮沸20分鍾,50℃烤乾備用. （三）塑料製品的清洗 塑料製品特點：質軟、易出現劃痕；耐腐蝕能力強、但不耐熱. 清洗程序：使用器皿後立即用清水清洗,浸於自來水過夜,用紗布或棉簽和50℃清洗液刷洗,流水沖洗,晾乾,浸於清潔液15分鍾,流水沖洗（15－20遍）,蒸餾水浸洗三次,雙蒸水泡24小時,晾乾備用. （四）包裝:對細胞培養用品進行消毒前,要進行嚴密包裝,以便於消毒和貯存.常用的包裝材料：牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、較大培養皿等,近幾年用鋁箔包裝,非常方便,適用.培養皿、注射器、金屬器械等用牛皮紙包裝後再裝入飯盒內,較大的器皿可以進行局部包紮. 二、消毒和滅菌 微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因 （一）物理消毒法 1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射,可殺死多種微生物.革蘭陰性菌最為敏感,其次是陽性菌,再次為芽孢,真菌孢子的抵抗力最強.紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活,間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物.直接照射培養室消毒,用法簡單,效果好. 紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關,輻射強度隨燈距離增加而降低,照射劑量和照射時間呈正比.因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合.離地面2米的30W燈可照射9平方米房間,每天照射2－3小時,期間可間隔30分鍾.燈管離地面2米以外要延長照射時間,2.5米照射效果較差.紫外燈照射工作台的距離不應超過1.5米,照射時間30分鍾為宜. 紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害,且對培養細胞與試劑等也產生不良影響,因此,不要開著紫外等操作. 2.高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是最常用的高溫濕熱滅菌方法.對生物材料有良好的穿透力,能造成蛋白質變性凝固而使微生物死亡.布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養液都可以用這方法滅菌. 不同壓力蒸汽所達到的溫度不同,不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同.從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品（不包括液體）,應立即放到60-70℃烤箱內烘乾,再貯存備用,否則,潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染.煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法,它具有條件簡單、使用方便等特點. 3.高溫乾熱消毒:乾熱滅菌主要是將電熱烤箱內物品加熱到160℃以上,並保持90－120分鍾,殺死細菌和芽孢,達到滅菌目的.主要用於滅菌玻璃器皿（如體積較大的燒杯、培養瓶）、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品（如粉劑、油劑）. 乾熱滅菌後要關掉開關並使物品逐漸冷卻後在打開,切忌立即打開,以免溫度驟變而使箱內的玻璃器皿破裂.干烤箱內物品間要有空隙,物品不要*近加熱裝置. 燒灼也是滅菌方法之一,常利用檯面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒. 4.過濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過濾,使大於孔徑的細菌等微生物顆粒阻留,從而達到除菌目的.在體外培養時,過濾除菌大多用於遇熱容易變性而失效的試劑或培養液.目前,大多實驗室採用微孔濾膜濾器除菌.關鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程. （二）化學消毒：新潔而滅,其0.1％水溶液可對器械、皮膚、操作表面進行擦拭和浸泡消毒. （三）抗生素消毒：抗生素主要用於消毒培養液,是培養過程中預防微生物污染的重要手段,也是微生物污染不嚴重時的「急救」方法.不同抗生素殺滅微生物不同,應根據需要選擇. 可用於細胞培養的消毒滅菌方法很多,但每種方法都有一定的適應范圍.如常用的過濾除菌系統、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實驗室空氣；多用新潔而滅消毒實驗室地面；常用乾熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養用器皿；採用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養液.
❿ 詳細介紹多效蒸餾器的工作原理及操作使用方法
太陽能海抄水蒸餾器 主題詞或關鍵詞: 太陽能 能源科學 蒸餾器 內容第二次世界大戰中,美國國防部製造了許多軍用海水淡化急救裝置,供飛行員和船員落水後取水用,這種裝置實際上是一種簡易的太陽能蒸餾容器。
對於微小的壓力降就會引起蒸汽的流動。在1mbar下運行要求在沸騰面和冷凝面之間非常短的距離,基於這個原理製作的蒸餾器稱為短程蒸餾器。短程蒸餾器(分子蒸餾)有一個內置冷凝器在加熱面的對面,並使操作壓力降到0.001mbar。