純化水計數方法適用性試驗

『壹』 純化水中的微生物檢測怎麼做 要詳細

採用濾膜法進來行微生物檢測源是一種國際公認的微生物標准檢驗方法，其得到AOAC、美國、歐洲和日本等國家的葯典、FDA和EPA等組織的承認，廣泛應用於環境監測、食品及飲料工業、化妝品、制葯工業品質控制和電子工業等領域。賽多利斯公司的濾膜法微生物檢測產品成功地應用於濾膜法已有20多年的歷史，實用而且方便實用，它簡化了微生物檢測程序。
濾膜法微生物檢測：
將適當孔徑的濾膜放入濾器，過濾樣品，由於濾膜的作用而將微生物保留在膜的表面上。樣品中微生物生長抑制劑可在過濾後用無菌水沖洗濾器而除去。然後，將濾膜放在培養基上培養，營養物和代謝物通過濾膜的微孔進行交換，在濾膜表面上培養出的菌落可以計數，並和樣品量相關。
濾膜法的優點：
- 與直接法比較，可以檢測大量的樣品
- 濃縮效應使微生物檢測的准確度提高
- 帶有菌落的濾膜，可作為檢測的永久記錄存檔
- 可見的菌落和樣品量直接對應，得出定量結果

操作具體一點就是：薄膜過濾法檢測，一個樣過濾一份，就是200ml的純化水通過濾膜，將該濾膜浸泡在滅菌好的l生理鹽水中，再接種到平皿中，製成10級、100級、1000級稀釋倍數的細菌、黴菌和酵母菌稀釋培養皿，即可

『貳』 純化水微生物限度檢查方法

在醫葯的生產過程中，純化水的質量是關繫到葯品質量的一個首要原因。純化水在生產，儲存和運輸的過程中，非常容易受到微生物的污染，因此對於水質的日常檢測是質量部門一個重要工作。對於純化水微生物限度檢查，各國所使用的方法不外乎與培養基澆注法，塗布法，膜過濾法，以及最大可能數法，最大的區別在於所使用的培養基不同。

我總結了以下對於純化水微生物限度檢查方法，同時我司熟悉純化水檢測相關標准和檢測項目要求，可提供專業、可靠的純化水檢測服務，出具國家認可的純化水微生物限度檢查報告。cma資質認證如下：

對於活力比較強的微生物，在高營養性培養基上可以快速大量的生長，而對於活力比較差的微生物，生長速度會比較緩慢。在日常生活中，這兩種微生物經常會同時出現由由於它們的生長速率不同，會產生無法完全檢出的現象，因此高營養性培養基和低營養性培養基常常會同時使用來提高微生物的檢出率，

培養的溫度和時間同樣是影響檢測的條件，高營養性培養基通常在30-35℃培養48-72小時，但是在同一個系統中，培養的時間越長，可以檢出的微生物數量就越多，低營養性培養基就在這時候被設計出來，有些培養基的培養時間甚至達到14天，可以至大化的復甦低營養性微生物及受損傷的微生物。但是檢測周期的延長，對於工作效率來說，是很不利的，因此我們需要一個既能保證效率，又能保證檢出率的辦法。

在比較了中國葯典，美國葯典中所記載的方法，中國葯典中純化水微生物檢查所用到的培養基是 R2A 瓊脂培養基，在30-35℃培養大於5天。美國葯典中對於純化水的微生物檢測用何種培養基沒有做強制性規定，只要求在水系統確認驗證及周期性確認驗證時，使用適當的方法對水系統中的微生物做出評價即可。

《中國葯典》2010版、2015版以及2020版純化水微生物限度檢查中表示，生產企業必須確保純化水的質量符合葯典要求，但葯典對於純化水的規定其實也只是至低水平，滿足了葯典的標准不一定就能保證符合企業預期用途的要求。因此，開展純化水微生物限度檢查直接影響到生產產品的安全質量，中科檢測具有純化水微生物限度核查檢測，具有獨立實驗室，報告具有CMA和CNAS資質。

『叄』 純化水微生物限度檢查法需要陽性對照嗎

4.10微生物限度(薄膜過濾法)
4.10.1取相當於每張濾膜含1g或1ml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。若供試品每1g或1ml所含的菌數較多時，可取適量稀釋劑的供試液1ml過濾。用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白腖緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量同「計數方法的驗證」。沖洗後取出濾膜，菌面朝上貼於營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基平板上培養。每種培養基至少制備一張濾膜。
4.10.2陰性對照試驗
取試驗用的稀釋液1ml，照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。
4.10.3培養和計數
除另有規定外，細菌培養48小時，逐日點計菌落數，一般以48小時的菌落數報告；黴菌、酵母菌培養72小時，逐日點計菌落數，一般以72小時的菌落數報告；必要時，可適當延長培養時間至5～7天進行菌落計數並報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數後，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數不少於15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。
4.10.4菌數報告原則
以相當於1g或1ml供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以<1報告菌數（每張濾膜過濾1g或1ml供試品），或<1乘以稀釋倍數的值報告菌數。

『肆』 純化水微生物限度檢查用薄膜過濾法怎麼做

准備工作：

用純化水浸泡濾膜，浸泡完全後放入濾杯中，包好濾杯，連同回量筒、培養基、平皿、答取膜器、三角燒瓶等一起121℃滅菌30min。

滅菌後的物品一並傳入潔凈室中，微生物限度過濾器上連好已經滅好的濾杯，用緩沖液先潤濕濾膜，抽掉緩沖液，然後倒入供試液（10倍稀釋），濾過，再用緩沖液沖洗濾膜。

過濾結束後取下濾膜平貼於R2A瓊脂培養基平板上，32℃倒置培養5天。菌落計數（平皿上長幾個菌結果就報幾個菌）

(4)純化水計數方法適用性試驗擴展閱讀：

薄膜過濾系統主要用於去除小顆粒及溶解鹽，一般可分為微濾、超濾、納濾和薄膜過濾反滲透。

微濾又稱微孔過濾，它屬於精密過濾，截留溶液中的砂礫、淤泥、黏土等顆粒和賈第蟲、隱抱子蟲、藻類和一些細菌等，而大量溶劑、小分子及少量大分子溶質都能透過膜的分離過程。

超濾是一種加壓膜分離技術，即在一定的壓力下，使小分子溶質和溶劑穿過一定孔徑的特製的薄膜，而使大分子溶質不能透過，留在膜的一邊，從而使大分子物質得到了部分的純化

納濾 ( NF，Nanofiltration)是一種介於反滲透和超濾之間的壓力驅動膜分離過程，納濾膜的孔徑范圍在幾個納米左右。

參考資料來源：網路-薄膜過濾

『伍』 純化水微生物限度檢查方法

4.10微生物限度(薄膜過濾法)
4.10.1取相當於每張濾膜含1g或1ml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。若供試品每1g或1ml所含的菌數較多時，可取適量稀釋劑的供試液1ml過濾。用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白腖緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量同「計數方法的驗證」。沖洗後取出濾膜，菌面朝上貼於營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基平板上培養。每種培養基至少制備一張濾膜。
4.10.2陰性對照試驗
取試驗用的稀釋液1ml，照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。
4.10.3培養和計數
除另有規定外，細菌培養48小時，逐日點計菌落數，一般以48小時的菌落數報告；黴菌、酵母菌培養72小時，逐日點計菌落數，一般以72小時的菌落數報告；必要時，可適當延長培養時間至5～7天進行菌落計數並報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數後，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數不少於15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。
4.10.4菌數報告原則
以相當於1g或1ml供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以<1報告菌數（每張濾膜過濾1g或1ml供試品），或<1乘以稀釋倍數的值報告菌數。
這是我們公司的純化水微生物檢測部分內容，請參考。

『陸』 純化水微生物限度檢查方法

4.10微生物限度(薄膜過濾法)
4.10.1取相當於每張濾膜含1g或1ml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。若供試品每1g或1ml所含的菌數較多時，可取適量稀釋劑的供試液1ml過濾。用pH7.0無菌氯化鈉－蛋白腖緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量同「計數方法的驗證」。沖洗後取出濾膜，菌面朝上貼於營養瓊脂培養基或玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基平板上培養。每種培養基至少制備一張濾膜。
4.10.2陰性對照試驗 取試驗用的稀釋液1ml，照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。
4.10.3培養和計數 除另有規定外，細菌培養48小時，逐日點計菌落數，一般以48小時的菌落數報告；黴菌、酵母菌培養72小時，逐日點計菌落數，一般以72小時的菌落數報告；必要時，可適當延長培養時間至5～7天進行菌落計數並報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數後，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。若同稀釋級兩個平板的菌落平均數不少於15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。
4.10.4菌數報告原則 以相當於1g或1ml供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以<1報告菌數（每張濾膜過濾1g或1ml供試品），或<1乘以稀釋倍數的值報告菌數。
這是我們公司的純化水微生物檢測部分內容，請參考。

『柒』 現在企業做微生物檢驗時是按新葯典方法嗎

2015版中國葯典微生物項變化的應對策略—檢驗方法
隨著葯典培訓陸續的展開，微生物的專項培訓也在全國如火如荼的舉辦，對於檢驗方法的討論也是授課的重點項目，這次葯典的升級，我們微生物檢驗方法中使用的環境、培養基、菌種甚至一些關鍵耗材的均發生了改變，所以方法適用性試驗避免不了的需要重新進行確認。那對於最早8月中旬才能看到葯典最終內容的很多企業來說，在今年的12月之前把所有出廠產品或原輔料/中間產品的微生物方法適用性試驗進行完也是相當不易，甚至是無法完成的。
本篇文章著重梳理應對葯典生效前後進行檢驗方法學的流程及關鍵點，由於各企業各產品的特點不一，內容閱讀前提是貴公司各供試品的方法適用性試驗步驟大家是心裡有數的，若還在方法摸索階段請參照15版葯典方法及各類培訓及書籍推薦的方法先進行供試液制備方法、濾膜、沖洗量的確定，故本篇文章不對實驗細節進行贅述；同時簡述在方法學完成前後如何對整個崗位管理類和操作類SOP進行梳理升級。
一、方法適用性試驗前的准備
1、 確認要進行方法適用性試驗的供試品
一般分為出廠產品、原輔料、中間產品等，如果時間緊張，比如企業在16年就要再次認證，且需要進行驗證的供試品多，建議可以和領導討論進行評估，先對出廠產品的方法學進行驗證然後再進行原輔料及中間產品的同步驗證，當然這個需要留下紙面的經審核批準的評估結果，對於微生物實驗室的人來說也是個執行依據。
如果不是新建企業的話，之前的那些供試品均按2010版葯典進行過驗證，基本上來說可以按之前的供試品制備方法和沖洗量進行驗證，那對於實驗室人員而言，除了實驗環境需要重新適應，其餘的培養基和菌種只要記得別加錯就好，其實也是駕輕就熟的，而且實驗的結果也不會太令人失望，這里僅指大多數做過驗證的有檢驗方法的供試品，也會有部分供試品無法直接復制，還需前期進行方法摸索，但是不論如何都要以嚴肅嚴謹的態度對待每一個方法學的驗證，因為這個是今後檢驗方法的依據。
2、 確認方法適用性試驗需要的環境
這里的環境包含潔凈室、陽性室、隔離器等設備，在進行方法適用性試驗前，這些環境均需要通過確認合格並滿足方法適用性試驗的環境條件後方可使用，這里還有個偷懶的方法，如果隔離器不是今年新買的，之前已對隔離器進行確認且已熟悉使用，今年要重新進行隔離器的PQ確認，其中的包裝完整性測試也可以和供試品的無菌檢查方法學同步進行驗證，當然這個是在實驗室有一定成功把握的前提下，否則不建議一起驗證，還是老實點分步進行。
3、 確認方法適用性試驗需要的物品
各供試品方法適用性試驗需要的物品不同，但是供試品、培養基和菌種是肯定要的，在進行方法適用性試驗前必須針對每種供試品列出需要物品的清單並經所有驗證參與人員確認，這樣便於實驗時不遺漏。在供試品量的確認中，必須嚴格按照葯典的檢驗量進行。
4、 確認方法適用性試驗參與人員
理論上來說，經過方法適用性試驗的人員才能進行該供試品該方法日常的檢驗工作，但是現實情況是實驗室人員流動率不低，部分人員並未經過方法適用性試驗，但是在每次方法適用性試驗時，必須界定現有人員中現有及今後參與該類實驗的人員名單，盡量讓其參與方法適用性試驗的流程中去並且理解整個驗證過程的內容和意義，這對於今後開展實驗會有很大的幫助。
5、 制定方法適用性試驗時間計劃
確認了以上4條內容後，並結合實驗室現有的正常工作就可大致計算出每種供試品方法適用性試驗需要的時間，必須列成計劃並經所有參與人員簽字確認，如無異常情況應嚴格按照時間表進行驗證，這樣才能保證不影響整體的部門葯典升級大計劃。
二、方法適用性試驗的實施
本次葯典升級在微生物限度檢查和無菌檢查這2大方法的適用性試驗的流程和判定標准在各類培訓中其實已經講的相當詳細了，我就再提一下比較容易忽略的幾個方面。
1、 無抑菌性供試品的方法適應性試驗必要性
曾經有次培訓遇到也是葯檢所的老師，哪個地方的我就不透露了，說如果你們企業能夠確認該供試品無抑菌性則可以不做微生物計數方法適應性試驗，當時我就對該觀點持有保留態度，這次QC微生物的同事從中檢所舉辦的培訓回來帶來的觀點也恰恰印證了這一點，所謂的對供試品中污染菌的影響並不單單指供試品的抑菌性，還有整個操作過程如供試品的制備過程、沖洗液的種類、沖洗量及次數，同時和使用的濾膜和濾器可能帶有的殘留抗菌物質也有關系，所以保守起見還是建議進行方法適用性試驗。
還有很多同行會問注射用水和純化水是否需進行微生物計數方法適應性試驗，這個的話我們企業是不進行的，但我沒有尋求過檢驗所老師的意見，大家有興趣可以去咨詢下。
2、 供試品方法適應性試驗的次數
這里的次數有三個版本，第一、使用三個不同批次的供試品，每批各進行一次試驗；第二、使用同一批次的供試品，進行三次試驗；第三、使用一批次供試品，進行一次試驗。現在沒有進行硬性控制，可以按企業不同的需求和

『捌』 純化水進行微生物限度檢測，使用薄膜過濾法應該取多少

准備工作：用純化水浸泡濾膜，浸泡完全後放入濾杯中，包好濾杯，連同量筒、培養基、專平皿、取膜器、三角屬燒瓶等一起121℃滅菌30min。滅菌後的物品一並傳入潔凈室中，微生物限度過濾器上連好已經滅好的濾杯，用緩沖液先潤濕濾膜，抽掉緩沖液，然後倒入供試液（10倍稀釋），濾過，再用緩沖液沖洗濾膜。過濾結束後取下濾膜平貼於R2A瓊脂培養基平板上，32℃倒置培養5天。菌落計數（平皿上長幾個菌結果就報幾個菌）

『玖』 純化水微生物限度檢查操作

純化水微生物限度操作規程
文件編號
總
頁
數
共
3
頁
制訂部門
實施日期
起
草
人
審
核
人
批
准
人
起草日期
審核日期
批准日期
1.
目的
本規程旨在為微生物限度檢查提供一個標准化方法。
2.
適用范圍
微生物限度實驗室
3.
責任者
QC
主管生測員
4.
安全注意事項
嚴格無菌操作，防止微生物污染。
5.
規程
5.1
取樣
a
．在車間、實驗室所有用水點按序取樣，標明日期和取樣點位置，一個監測
點取水
3
次，一次
250mL
，送檢驗室按中國葯典
2010
年版二部標准進行全檢。
b
．
取樣前將直接接觸樣品的容器用
75%
酒精棉球進行擦拭，
採用滅菌後瓶收
集樣品。
c
．取樣時，取樣人洗手並消毒，取樣前用純化水淋洗檢驗用取樣瓶和瓶塞
3
次。滅菌瓶至少取
200mL
用於微生物檢驗用水，微生物檢驗應在取樣後的
1
小
時內進行，或將樣品冷藏並在
4
小時內進行檢驗。
5.2
微生物限度檢查
純化水檢驗標准微生物限度檢查採用平皿法和薄膜過濾法。
5.3
微生物培養
（
1
）
除另有規定，
本檢查法中細菌培養溫度為
30-35
℃，黴菌、酵母菌培養溫
度為

『拾』 純化水的微生物限度里的薄膜過濾法如何計數啊

採用薄膜過濾法進行細菌試驗,誤判風險要小些,所以發現問題的概率比直接接種法要大些。內所以，葯典要求細菌試容驗採用薄膜過濾法是有道理的。 tIet^:Ug
純化水微生物限度檢測薄膜過濾法是葯典方法，已經是做了驗證的，所以企業沒有必要再做方法評價。