⑴ ELISA實驗中如何包被抗原、抗體的呢
包被抗體就是你買過來的板子中已經被包在
96孔板
裡面的抗體，包被抗原就是你要檢測的東西，加到96孔板中就被稱作包被抗原了
⑵ ELISA中包被抗體與一抗有何區別
包被抗體可以結合待檢測的抗原,多抗和單抗都可以的,用樣的一抗也是和待檢測的抗原結合,如果抗體較多
⑶ 怎樣提高免疫層析包被抗體的穩定性
包被抗體就是你買過來的板子中已經被包在96孔板裡面的抗體，包被抗原就是你要檢測的東西，加到96孔板中就被稱作包被抗原了
⑷ 實驗中用PBS作為CD3功能抗體的稀釋液，即CD3抗體包被在培養板上的包被液，包被液可以用D-Hank's液代替嗎
可以的 你大概是做T淋巴細胞增殖實驗吧
⑸ ELISA檢測抗體的方法中，包被抗原後封閉前要不要洗板封閉後加一抗前要不要洗板，謝謝各位老師指點！
您問的這個問題我也曾疑惑過，我跟您交流一下我的想法。
封閉前要不要洗板？我覺得是要的。因為包被液同封閉液的成分不同，pH也可能不一樣，有必要將孔板洗凈。
加一抗前要不要洗板？我覺得要看情況。一般的ELISA實驗中封閉液同時也是一抗稀釋液，這時就沒必要洗板了。但是如果一抗稀釋液同封閉液成分不同，則應該洗板，去除封閉液的游離成分。
⑹ ELISA實驗中需要包被抗體或者抗原怎麼包被使其固相化
（一）包被用抗原
用於包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養物等，須經提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細菌和病毒抗原可以從其培養物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提取）。重組抗原是抗原基因在質粒體中表達的蛋白質抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質粒體。重組抗原的優點是除工程菌成份外，其他雜質少，而且無傳染性，但純化技術難度較大。以大腸桿菌為質粒體的重組抗原如不能充分除大腸桿菌成份，用於ELISA試劑盒，在反應中可出現假陽性，因不少受檢者受大腸桿菌感染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點是能用基因工程制備某些無法從天然材料中分離的抗原物質。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培養成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微。目前檢測抗HCVELISA中所用包被抗原大多為根據HCV的基因克隆表達而制備的重組抗原。在傳染病診斷中，不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得應用。合成多肽抗原是根據蛋白質抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由於分子量太小，往往難於直接吸附於固相上。多肽抗原的包被一般需先使其與無關蛋白質如牛血清白蛋白質（BSA）等偶聯，藉助於偶聯物與固相載體的吸附，間接地結合到固相載體表面。應用多肽抗原的另一注意點為他僅能檢測與其相應的抗體。一種蛋白質抗原往往含有多個不同的能引起抗體產生的決定簇，因此在受檢血清中的其他抗體就不能與該多肽抗原發生反應。另外，某些微生物發生變異時往往發生抗原結構變化，在這種情況下，用個別多肽抗原進行包被可引起其他抗體的漏檢。
⑺ 免疫層析怎樣提高包被抗體的穩定性
elisa抗原包被和抗體包被的區別
（一）包被用抗原
用於包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養物等，須經提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細菌和病毒抗原可以從其培養物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提取）。重組抗原是抗原基因在質粒體中表達的蛋白質抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質粒體。重組抗原的優點是除工程菌成份外，其他雜質少，而且無傳染性，但純化技術難度較大。以大腸桿菌為質粒體的重組抗原如不能充分除大腸桿菌成份，用於ELISA試劑盒，在反應中可出現假陽性，因不少受檢者受大腸桿菌感染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點是能用基因工程制備某些無法從天然材料中分離的抗原物質。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培養成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微。目前檢測抗HCVELISA中所用包被抗原大多為根據HCV的基因克隆表達而制備的重組抗原。在傳染病診斷中，不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得應用。合成多肽抗原是根據蛋白質抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由於分子量太小，往往難於直接吸附於固相上。多肽抗原的包被一般需先使其與無關蛋白質如牛血清白蛋白質（BSA）等偶聯，藉助於偶聯物與固相載體的吸附，間接地結合到固相載體表面。應用多肽抗原的另一注意點為他僅能檢測與其相應的抗體。一種蛋白質抗原往往含有多個不同的能引起抗體產生的決定簇，因此在受檢血清中的其他抗體就不能與該多肽抗原發生反應。另外，某些微生物發生變異時往往發生抗原結構變化，在這種情況下，用個別多肽抗原進行包被可引起其他抗體的漏檢。
（二）ELISA試劑盒包被用抗體
包被固相載體的抗體應具有高親和力和高特異性，可取材於抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養液。如免疫用抗原中含有雜質（即便是極微量的），在抗血清中將出現雜抗體，必須除去（可用吸收法）後才能用於ELISA，以保證試驗的特異性。抗血清不能直接用於包被，應先提取IgG，通常採用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用於包被，高度純化的IgG性質不穩定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性，則可採用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高，特異性亦較強，因此不需要作吸收和親和層析處理，一般可將腹水作適當稀釋後直接包被，必要時也可用純化的IgG。應用單抗包被時應注意，一種單抗僅針對一種抗原決定簇，在某些情況下，用多種單抗混合包被，可取得更好的效果。
⑻ 我是做ELISA實驗的初學者，最近在建立雙抗體夾心法的檢測方法，不知道如何確定包被濃度和抗原濃度，謝謝！
你是不知道包被的濃度還是不知道怎樣配治包被液啊？
我這里有份ELISA的實驗過程。不過是除掉前兩部的。
1、 加被檢抗原（重組蛋白或自然樣品）：用稀釋液（DS01、AS01、AS02、AS03、AS04）將被檢抗原按實驗設計稀釋，每孔100µl，同時用稀釋液作空白對照。封板膜封板，室溫放置兩小時。
2、 洗滌：到盡板孔中的液體，加滿洗滌液（WS03），靜止放十秒，洗四次，最後在毛巾或吸水紙上拍干板子：
3、 加檢測抗體：將生物素標記的檢測抗體稀釋適當濃度（稀釋液DS01），每孔100 µl封板膜封板，室溫放置一小時：
4、 洗滌：到盡板孔中的液體，加滿洗滌液（WS03），靜止放十秒，洗四次，最後在毛巾或吸水紙上拍干板子：
5、 加親和素-辣根過氧化酶（HRP）稀釋適當濃度（稀釋液HD01）每孔100µl，封板膜封板，室溫放置30分鍾：
6、 加底物：新鮮配製的四甲基聯苯胺溶液（TMB），每孔100µl，室溫暗處放置30分鍾：
7、 加終止液（SS01）：每孔100µl，立即讀值：
8、 觀察結果：用酶標儀記錄450nm讀數.
⑼ 想請問有關抗體包被的問題.在用酶標板包被抗體，然後
洗滌時候不會被甩出去。因為在放水浴箱里孵育的那段時間里，血清已經跟杯子里的化學試劑起了反應，粘附在裡面了，洗滌甩干只是洗去多餘的液體而已