Ⅰ 在光度分析中參比溶液的作用是什麼
一、原理
可見光、紫外線照射某些物質，主要是由於物質分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收，而產生化合物的可見紫外吸收光譜。基於物質對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯——比耳定律為基礎。
1
朗伯—比耳定律 A = lg—- = ECL
T
式中 A為吸收度；
T為透光率；
E為吸收系數，採用的表示方法是（E1％1cm），其物理意義為當溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時的吸收度數值；
C為100ml溶液中所含被測物質的重量（按乾燥品或無水物計算），g；
L為液層厚度，cm。
二、使用范圍
凡具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用於葯品的鑒別、純度檢查及含量測定。
三、儀器
可見-紫外分光光度計。其應用波長范圍為200～400nm的紫外光區、400～850nm的可見光區。主要由輻射源（光源）、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成。
本儀器是根據相對測量的原理工作的，即先選定某一溶劑（或空氣、試樣）作為標准（空白或稱參比）溶液，並認為它的透光率為100％（或吸收度為0），而被測的試樣透光率（或吸收度）是相對於標准溶液而言，實際上就是由出射狹縫射出的單色光，分別通過被測試樣和標准溶液，這兩個光能量之比值，就是在一定波長下對於被測試樣的透光率（或吸收度）。
本儀器可精密測定具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物、有色物質或在適當條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質。
使用前應校正測定波長並按儀器說明書進行操作。
四、儀器的校正
1.波長的准確度試驗
以儀器顯示的波長數值與單色光的實際波長值之間誤差表示，應在±1.0nm范圍內。
可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正。
2.吸收度的准確度試驗
3.雜散光的試驗
4.波長重現性試驗
5.解析度試驗
五、測定方法
1.對照品比較法
（1）按各品種項下的方法，分別配製供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%，所用溶劑也應完全一致，在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度後，按下式計算含量，即得。
（2）計算式
A樣×G對/稀釋倍數×100×1
含量（%）= ————————————-- ×100%
A對×G樣/稀釋倍數×100×1
2.吸收系數法
（1）按各品種項下的方法配製供試品溶液，在規定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量。用本法測定時，應注意儀器的校正和檢定。
（2）計算式
A樣
含量（%）= ——————————————- ×100%
G樣/稀釋倍數×(E1％1cm)對×100×1
3.計算分光光度法
採用計算分光光度法應慎重。本法有多種，使用時均應按各品種項下規定的方法進行。當吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應盡可能一致。若測定時不用對照品，如維生素A測定法，則應在測定時對儀器作仔細的校正和檢定。
六、注意事項
1.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應預先過濾，並棄去初濾液。
2.測定時，除另有規定外，應以配製供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，採用1cm的石英吸收池。
3.在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內；否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的准確度，並以吸收度最大的波長作為測定波長。
4.一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間的誤差較小。
5.吸收池應選擇配對，否則要引入測定誤差。在規定波長下兩個吸收池的透光率相差小於0.5％的吸收池作配對，在必要的情況時，須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值。
6.由於吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度後應減去空白讀數，再計算含量。
7.儀器的接地必須良好，一切裸露的零件對地電位不得超過24伏（測電筆的氖管不得發亮）。
8.在使用過程中，如需開啟試樣室蓋時或暫時停止測試時，必須及時推入光門鈕桿（使光電管前光門關閉），保護光電管，以防止光電管受強光或長時間照射而損壞。
9.在測定時或改測其它檢品時，應用待測溶液沖洗吸收池3～4次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）。
10.取吸收池時，應拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完後及時用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦乾，晾乾後，放入吸收池盒中，防塵保存。
11.若吸收池內外壁沾污，兩池差較大的處理。
（1）可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水沖凈。
（2）如上述方法處理不好，必要時可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗1～2分鍾，用自來水沖凈，再用純化水沖凈。
（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。
12.請務必注意經常保持硅膠的乾燥，目的是保護光學元件和光電放大器系統不致受潮損壞而影響儀器的正常工作，如發現有的硅膠由藍色變為粉紅色，應立即更換。該儀器乾燥劑筒有兩個：一個是裝在放大器暗盒上，另一個裝在單色光器暗盒上。
13.在更換硅膠乾燥劑時，應關閉切斷電源。
14.在停止工作期間，主機試樣室內應放入袋裝或筒裝硅膠乾燥劑。用防塵罩罩住整個儀器，並在防塵罩內放數袋防潮硅膠。
15.儀器在操作中，狹縫的寬度應從小逐漸開大。若狹縫過大，由於進入光電管的光能量強度過大，將會使放大器輸出信號達到飽和，以至數字顯示出溢出（即數字閃爍或示1不變）。這不是儀器有故障。
16.將波長旋轉放在625nm，鋏縫關閉在0.02nm附近，選擇按鍵恢復在停止工作部位（即三個鍵均彈出）。
17.搬動儀器時應搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位，以防止儀器狹縫或光路部件受力而發生變形。並在搬動或運輸時，應將可動部分固定，如各旋鈕可用膠布貼住，狹縫位置開大些，然後固定，不要關小狹縫，以免運輸時振動使狹縫刀口受損壞。
18.儀器的光柵、反射鏡絕對不能擦拭，否則將損壞儀器光學表面，增加雜散光。
19.儀器經過搬動請及時檢查並糾正波長精度，為保證測定的准確性請經常校準波長精度。如有異常，應立即報告質量保證部，但不得擅自調整，並及時做好記錄。
七、結果計算
A
E1％1cm（供試品） = ——
CL
E1％1cm（供試品）
含量（%）= ——————————- ×100%
E1％1cm（標准值或對照品）
八、允許差
儀器分析方法的誤差限度，除另有規定外，其相對偏差應在±(2.0～3.0)%。
( 來自網路博客)
Ⅱ 以高純水為參比測定其吸光度是什麼意思
「進行分光光度計調節時，將高純水推入光路調節100%透光比」這是正確的做法
「水樣顯色反應後測得到的吸光度減去高純水作為水樣進行顯色反映後測得的吸光度」這是正確的原理，lz說的對
Ⅲ 分光光度法測定高錳酸鉀溶液的濃度中為什麼要用純化水作參比溶液
純化水中的雜質等干擾最小。能准確確定高錳酸鉀的量。配製高錳酸鉀的標准品時也需要用純化水。
Ⅳ 試劑空白就是以純水做參比嗎
不是這樣的，試驗中的「空白試驗」,系指在不加供試品或以等量溶劑替代供試液的情況下,按同法操作所得的結果。如果是在做污水監測實驗時，有空白試驗的話，就可以用蒸餾水作為空白試劑了。
Ⅳ 樣品吸光度值小於標線范圍要怎麼處理(用純水作參比有沒有影響)
「進行分光光度計調節時，將高純水推入光路調節100%透光比」這是正確的做法 「水樣顯色反應後測得到的吸光度減去高純水作為水樣進行顯色反映後測得的吸光度」這是正確的原理，lz說的對
Ⅵ 以純水做參比 是否要加葯品 還是只是純水
就是用純水，不加葯品。否則就說用標准液做參比了。
Ⅶ 純水作參比和試劑空白作參比
不同就來在於試劑空白不止含有源水,而還含有其他東西,比如無機鹽,緩沖液等,而這些東西都有吸光值,該實驗測定的是磷濃度,所以空白試劑必須把樣品廢水中除了磷以外的有吸光值的雜質因素扣除,而用水的話就沒有考慮這些雜質,算出來的其實是磷加上其他有吸光值的雜質的總吸光值
Ⅷ 酚鹽光度法
方法提要
氨在鹼性溶液中與次氯酸鹽生成一氯胺，在亞硝基鐵氰化鈉催化下與酚生成吲哚酚藍染料，光度法測定。一氯胺和吲哚酚藍的形成均與溶液pH值有關。次氯酸與氨在pH為7.5以上主要生成二氯胺;當pH降低至5～7和4.5以下，則分別生成二氯胺和三氯胺;pH在10.5～11.5之間，生成的一氯胺和吲哚酚藍都較為穩定，且呈色最深。用光度法直接測定時，需加入檸檬酸防止水中鈣、鎂離子生成沉澱。
本法最低檢測質量為0.25μg。若取10mL水樣測定，檢測下限為0.025mg/L。
單純的懸浮物可通過0.45μm濾膜過濾，干擾物較多的水樣需經蒸餾後再進行測定。
儀器和裝置
分光光度計。
具塞比色管10mL。
試劑
本法所用試劑均需用不含氨的純水配製。
酚-乙醇溶液稱取62.5g精製的苯酚(無色)溶於45mL(95+5)乙醇中，保存於冰箱中。如發現空白值增高，應重配。
亞硝基鐵氰化鈉溶液(10g/L)稱取1g亞硝基鐵氰化鈉(又名硝普鈉)溶於少量純水中，稀釋至100mL，貯存於冰箱中。如發現空白值增高，應重配。
氫氧化鈉溶液(240g/L)稱取120g氫氧化鈉溶於550mL純水中，煮沸並蒸發至450mL，冷卻後加純水稀釋至500mL。
檸檬酸鈉溶液(400g/L)稱取200g檸檬酸鈉溶於600mL純水中，煮沸蒸發至450mL，冷卻後加純水稀釋至500mL。
酚鹽-檸檬酸鹽溶液將3.0mL亞硝基鐵氰化鈉溶液、5.0mL酚-乙醇溶液、6.5mL氫氧化鈉溶液及50mL檸檬酸鈉溶液混合均勻。在冰箱中保存，可使用2～3d。
含氯緩沖溶液稱取12gNa2CO3和0.8gNaHCO3溶於100mL純水中。加入34mL30g/LNaClO溶液(又稱安替福明)，並加純水至200mL，放置1h後即可使用。取本試劑1mL用純水稀釋至50mL，加入1gKI及3滴H2SO4，以澱粉溶液作指示劑，用0.02500mol/L硫代硫酸鈉標准溶液滴定生成的碘，應消耗5.6mL左右。如低於4.5mL應補加NaClO溶液。兩種試劑混合後pH值的校正:加1.0mL酚鹽-檸檬酸鹽溶液和0.4mL含氯緩沖溶液於10mL純水中，其pH值應在11.4～11.8，否則應在酚鹽-檸檬酸鹽溶液中再加入適量NaOH溶液。
銨離子標准儲備溶液見81.12.1。
銨離子標准溶液ρ(NH+4)=5.00μg/mL吸取5.00mL銨離子標准儲備溶液於1000mL容量瓶中，加純水稀釋至刻度。臨用時配製。
校準曲線
於8支10mL具塞比色管中吸取0mL、0.05mL、0.10mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL和4.00mL銨離子標准溶液，加純水至10mL。各加入1.0mL酚鹽-檸檬酸鹽溶液，立即加入0.4mL含氯緩沖溶液，充分混勻，靜置90min，於波長630nm下，用1cm比色皿，以純水作參比，測量吸光度，繪制校準曲線:
分析步驟
於每升水樣中，加入0.8mLH2SO4，並在4℃保存。如有可能，最好在采樣時立即過濾，並加入試劑顯色，使測定結果更為准確。
對於直接測定的水樣，加H2SO4固定時必須注意酸的用量。一般水樣，每升加0.8mLH2SO4已足夠，鹼度大的水樣可適當增加。應注意勿使過量，以免使加顯色劑後pH值不能控制在10.5～11.5。
取10.0mL澄清水樣或水樣蒸餾液，於10mL具塞比色管中，按校準曲線步驟操作測定吸光度，從校準曲線上查出樣品管中銨離子的質量。
試劑空白值取10mL純水，置於10mL具塞比色管中，加入0.4mL含氯緩沖溶液，混勻，靜置0.5h，將存在於水中的微量氨氧化分解，然後加入1.0mL酚鹽-檸檬酸鹽溶液，靜置90min，測量吸光度，即為不包括稀釋水在內的試劑空白值。
水樣中銨離子的質量濃度的計算參見公式(81.9)。
不同形式表示的分析結果，可依照表81.6進行換算。
Ⅸ 分光光度計參比溶液問題
空白溶液是指無色透明、吸光率接近於0的液體，以它作為參比。一般情況下水就完全符合要求 。因為水來源廣泛，廉價無毒無腐蝕。所以都用水的。
Ⅹ 分光光度法分析中,為什麼要使用參比溶液
一、原理
可見光、紫外線照射某些物質,主要是由於物質分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收,而產生化合物的可見紫外吸收光譜.基於物質對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法.它是以朗伯——比耳定律為基礎.
朗伯—比耳定律 A = lg—- = ECLT
式中 A為吸收度；
T為透光率；
E為吸收系數,採用的表示方法是（E1％1cm）,其物理意義為當溶液濃度為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時的吸收度數值；
C為100ml溶液中所含被測物質的重量（按乾燥品或無水物計算）,g；
L為液層厚度,cm.
二、使用范圍
凡具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物,根據在特定吸收波長處所測得的吸收度,可用於葯品的鑒別、純度檢查及含量測定.
三、儀器
可見-紫外分光光度計.其應用波長范圍為200～400nm的紫外光區、400～850nm的可見光區.主要由輻射源（光源）、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成.
本儀器是根據相對測量的原理工作的,即先選定某一溶劑（或空氣、試樣）作為標准（空白或稱參比）溶液,並認為它的透光率為100％（或吸收度為0）,而被測的試樣透光率（或吸收度）是相對於標准溶液而言,實際上就是由出射狹縫射出的單色光,分別通過被測試樣和標准溶液,這兩個光能量之比值,就是在一定波長下對於被測試樣的透光率（或吸收度）.
本儀器可精密測定具有芳香環或共軛雙鍵結構的有機化合物、有色物質或在適當條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質.
使用前應校正測定波長並按儀器說明書進行操作.
四、儀器的校正
1.波長的准確度試驗
以儀器顯示的波長數值與單色光的實際波長值之間誤差表示,應在±1.0nm范圍內.
可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正.
2.吸收度的准確度試驗
3.雜散光的試驗
4.波長重現性試驗
5.解析度試驗
五、測定方法
1.對照品比較法
（1）按各品種項下的方法,分別配製供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%,所用溶劑也應完全一致,在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度後,按下式計算含量,即得.
（2）計算式
A樣×G對/稀釋倍數×100×1
含量（%）= ————————————-- ×100%
A對×G樣/稀釋倍數×100×1
2.吸收系數法
（1）按各品種項下的方法配製供試品溶液,在規定的波長處測定其吸收度,再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量.用本法測定時,應注意儀器的校正和檢定.
（2）計算式
A樣
含量（%）= ——————————————- ×100%
G樣/稀釋倍數×(E1％1cm)對×100×1
3.計算分光光度法
採用計算分光光度法應慎重.本法有多種,使用時均應按各品種項下規定的方法進行.當吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時,波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響,故對照品和供試品測試條件應盡可能一致.若測定時不用對照品,如維生素A測定法,則應在測定時對儀器作仔細的校正和檢定.
六、注意事項
1.空白溶液與供試品溶液必須澄清,不得有渾濁.如有渾濁,應預先過濾,並棄去初濾液.
2.測定時,除另有規定外,應以配製供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照,採用1cm的石英吸收池.
3.在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規定外,吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內；否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的准確度,並以吸收度最大的波長作為測定波長.
4.一般供試品溶液的吸收度讀數,以在0.3～0.7之間的誤差較小.
5.吸收池應選擇配對,否則要引入測定誤差.在規定波長下兩個吸收池的透光率相差小於0.5％的吸收池作配對,在必要的情況時,須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值.
6.由於吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸收度後應減去空白讀數,再計算含量.
7.儀器的接地必須良好,一切裸露的零件對地電位不得超過24伏（測電筆的氖管不得發亮）.
8.在使用過程中,如需開啟試樣室蓋時或暫時停止測試時,必須及時推入光門鈕桿（使光電管前光門關閉）,保護光電管,以防止光電管受強光或長時間照射而損壞.
9.在測定時或改測其它檢品時,應用待測溶液沖洗吸收池3～4次,用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）.
10.取吸收池時,應拿毛玻璃兩面,切忌用手拿捏透光面,以免粘上油污.使用完後及時用測定溶劑沖凈,再用純化水沖凈,用干凈綢布或擦鏡紙擦乾,晾乾後,放入吸收池盒中,防塵保存.
11.若吸收池內外壁沾污,兩池差較大的處理.
（1）可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細玻璃棒上蘸上乙醇,輕輕摩擦,再用純化水沖凈.
（2）如上述方法處理不好,必要時可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗1～2分鍾,用自來水沖凈,再用純化水沖凈.
（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦,以防止表面光潔度受損影響正常使用.
12.請務必注意經常保持硅膠的乾燥,目的是保護光學元件和光電放大器系統不致受潮損壞而影響儀器的正常工作,如發現有的硅膠由藍色變為粉紅色,應立即更換.該儀器乾燥劑筒有兩個：一個是裝在放大器暗盒上,另一個裝在單色光器暗盒上.
13.在更換硅膠乾燥劑時,應關閉切斷電源.
14.在停止工作期間,主機試樣室內應放入袋裝或筒裝硅膠乾燥劑.用防塵罩罩住整個儀器,並在防塵罩內放數袋防潮硅膠.
15.儀器在操作中,狹縫的寬度應從小逐漸開大.若狹縫過大,由於進入光電管的光能量強度過大,將會使放大器輸出信號達到飽和,以至數字顯示出溢出（即數字閃爍或示1不變）.這不是儀器有故障.
16.將波長旋轉放在625nm,鋏縫關閉在0.02nm附近,選擇按鍵恢復在停止工作部位（即三個鍵均彈出）.
17.搬動儀器時應搬在主體端,不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位,以防止儀器狹縫或光路部件受力而發生變形.並在搬動或運輸時,應將可動部分固定,如各旋鈕可用膠布貼住,狹縫位置開大些,然後固定,不要關小狹縫,以免運輸時振動使狹縫刀口受損壞.
18.儀器的光柵、反射鏡絕對不能擦拭,否則將損壞儀器光學表面,增加雜散光.
19.儀器經過搬動請及時檢查並糾正波長精度,為保證測定的准確性請經常校準波長精度.如有異常,應立即報告質量保證部,但不得擅自調整,並及時做好記錄.
七、結果計算
A
E1％1cm（供試品） = ——
CL
E1％1cm（供試品）
含量（%）= ——————————- ×100%
E1％1cm（標准值或對照品）
八、允許差
儀器分析方法的誤差限度,除另有規定外,其相對偏差應在±(2.0～3.0)%.