❶ 求助DEAE-Sephadex A25 柱料處理再生方法
飛秒檢測發現sephadex G-25層析柱填料是葡聚糖交聯的凝膠柱,G-X, X:(1)交聯度。X越小,交聯度越大,網孔越小,適用於分離低分子量產品,反之亦然。(2)吸水量。為凝膠得水值的10倍.例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克.凝膠柱使用一次後,必須反沖疏鬆一次,平衡後再使用。若使用數次,就需要再生處理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡,然後用蒸餾水洗至中性備用。若實驗完畢,將再生後的凝膠在布氏漏鬥上用蒸餾水洗滌抽干,再用95%乙醇洗兩次,在60℃烘箱中烘乾,回收保存。
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素,是陰離子交換劑。基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。離子交換層析中,基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。帶有正電荷的稱之陰離子交換樹脂;而帶有負電荷的稱之陽離子樹脂。離子交換層析同樣可以用於蛋白質的分離純化。由於蛋白質也有等電點,當蛋白質處於不同的pH條件下,其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質,所以這類蛋白質被留在柱子上,然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施,將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質,結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/:NaCl淋洗柱,若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱;若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱後再生,也可用乙醇洗滌,其順序為:0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定(洗必泰),陽離子交換劑可用乙基硫柳汞(0.005%)。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
兩種填料的抗酸鹼性和抗腐蝕性能不同。
❷ 樹脂如何清理
先用熱水反復清洗,每隔約15分鍾換水一次,浸洗時要不時攪動,換水4-5次後,可隔約30分鍾換水一次,總共換水7-8次,浸洗至清水中不帶褐色後,用清水沖洗干凈即可。
具體操作步驟如下:
1、首先將樹脂放入熱水中反復清洗。
2、清洗時,每隔約15分鍾換水一次。
3、而且在浸洗時要不時攪動。
4、換水4-5次後,可隔約30分鍾換水一次,總共換水7-8次。
5、浸洗至清水中不帶褐色後,用清水沖洗干凈即可。
❸ 樹脂為何要用酒精洗
兩方面原因吧:
1乙醇為常見有機溶劑,價格便宜。
2 乙醇對環境危害小。
❹ 大孔樹脂的預處理
大孔吸附樹脂是一類有機單體加交聯劑、致孔劑、分散劑等添加劑聚合而成,
因而購來的樹脂要除去可能存在的毒性有機殘留物。具體方法為,首先使用飽和食鹽水(工業用),用量約等於被處理樹脂的2 倍,將樹脂置於食鹽中浸泡18~20 h ,然後放盡食鹽水,用清水漂洗凈,使排出的水不顯黃色,再用2 %~4 %氫氧化鈉(或5 %鹽酸) 溶液(其量與上同) 浸泡2~4h(或小流量清洗) ,放盡鹼或酸液後沖洗樹脂直至水接近中性待用。實驗室用常用>95%的乙醇。 以乙醇濕法裝柱,繼續用乙醇在柱上流動清洗,不時檢查流出的乙醇,至與水混合不呈白色混濁為止(取1 mL乙醇液加5 mL水)。然後以大量的蒸餾水洗去乙醇,備用。少量乙醇存在將會大大降低樹脂的吸附力。
3. 再生樹脂柱經反復使用後,樹脂表面及內部殘留許多非吸附性成分或雜質使柱顏色變深,柱效降低,因而需要再生,一般用95 %乙醇洗至無色後用大量水洗去醇化即可。如樹脂顏色變深可用稀酸或稀鹼洗脫後水洗。如柱上方有懸浮物可用水、醇從柱下進行反洗可將懸浮物洗出,經多次使用有時柱床擠壓過緊或樹脂顆粒破碎影響流速,可從柱中取出樹脂,盛於一較大容器中用水漂洗除去小顆粒或懸浮物再重新裝柱使用。
將樣品溶於少量水中加至柱的上端,也可以將樣品先溶於少量乙醇中,拌入適量樹脂,揮去乙醇後,再將拌有樣品的樹脂加到柱上。先用水,繼而以乙醇-水洗脫,逐步加大醇的濃度,同時配合高效液相色譜法作指導。一般用95%的乙醇洗脫至無色時,樹脂柱即已再生,然後以大量水洗去醇,即可進行下一次的提取分離。經反復使用後,吸附樹脂顏色變深,吸附效果下降時,可用0.01%~1 mol/L NaOH(或HCl)洗滌或浸泡適當時間,至樹脂接近原顏色為宜,繼用蒸餾水洗至中性即可再用。如果柱上方沉積有懸浮物,影響流速,可用水從柱上進行反洗,以便把懸浮物頂出。經多次使用後,有時柱床擠壓過緊,或樹脂顆粒部分破碎而影響流速,可從柱中取出樹脂,盛於一個較大容器中用水漂洗除去小顆粒和懸浮雜質,再重新裝柱。大孔吸附樹脂應濕態保存,若部分顆粒暴露在空氣中失水,在進行水溶性雜質分離時,失水後被空氣填充的顆粒會浮於水面,此時將上浮樹脂用乙醇處理,將樹脂內部的空氣排出後使用。
❺ DEAE Sephadex A-25的使用方法及注意事項
產品簡介
DEAE Sephadex A-25是以交聯葡聚糖為基質的弱陰離子交換劑,適合批量進行分離層析,具有很好的結合能力。葡聚糖離子交換劑是將功能基團通過醚鍵偶聯到交聯葡聚糖上。根據配基基團不同分為:DEAE、QAE和CM 3種,分別包括兩種不同的孔徑:A-25/C-25和A-50/C-50。
產品參數
產品名稱: DEAESephadex A-25
貨號: 17-0170-02
基質: 交聯葡聚糖
顆粒大小: 40-120μm
配基: 二乙胺乙基
離子容量: 3-4mmol/g
每毫升蛋白載量: HSA-30mg;α-乳白蛋白-140mg
最大流速: 45cm/h
工作pH: 2-9;2-13(在位清洗)
化學穩定性: 在水溶液中穩定例如:8M 尿素和6M鹽酸胍溶液
操作溫度:室溫
保存條件:4-30°C(乾粉);4-8°C(用過的柱子,保存在20%乙醇或者0.01M NaOH)
實驗步驟
1.預處理
稱取所需質量的DEAE Sephadex A-25乾粉,溶於緩沖溶液中;不同緩沖溶液凝膠的膨脹系數不一樣。一般1g DEAESephadex A-25溶於25mL的鹽溶液中。選擇後續實驗相同的pH的緩沖液進行溶脹。室溫溶脹一般需要2天,沸水浴溶脹一般需要2小時,同時還能夠排除溶膠中的氣泡。磁力攪拌時應注意不要破環凝膠顆粒。用布氏漏斗進行沖洗,使其保存在初始的緩沖液中。按凝膠:緩沖液=3:1比例配成勻漿。
2.裝柱
(1)平衡所有試劑和填料平衡至室溫。
(2)將層析柱垂直固定於滴定鐵架上,柱底墊一園尼龍紗,出水口接一乳膠或塑料管並關閉開關。
(3)將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕並保持一小段液體(液面略高於濾膜),務必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意不要使用氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
3.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。
4.上樣
(1)樣品用平衡液配製,渾濁的樣品要離心、過濾後上柱;
(2)一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡洗液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
5.洗脫
對於DEAE Sephadex A-25一般使用增大鹽離子濃度或者降低pH的連續或者梯度洗脫。
6.再生
一般用高鹽濃度的緩沖液(1-2M NaCl)沖洗,洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活的蛋白或者脂類物質在再生時洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
7.在位清洗
(1)對於以離子鍵結合上去的蛋白,可以用0.5-1柱床體積的2M NaCl去除。
(2)對沉澱蛋白、以疏水作用結合的蛋白或者脂類物質,可用1柱床體積的0.1M NaOH去除。
(3)對強疏水性結合的蛋白、脂類等,可用4-10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產生氣泡。清洗完畢後,用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。
注意事項
(1)用過的柱子密封貯存於4°C(保存溶液為20%乙醇或者0.01 M NaOH),通風、乾燥的地方,不能冷凍。
(2)在裝柱、使用和保存柱子的時候,要避免柱子流干,氣泡進入。
❻ 樹脂的近視眼鏡可以用酒精擦拭嗎
下午好,不一定建議謹慎處理。樹脂鏡片分為很多種高聚物比如PMMA(亞克力)、PS(有機板聚苯專乙烯)、屬PC(聚碳酸酯)和PVC(聚氯乙烯),酒精的主要成份是無水乙醇,它不能侵蝕PC和PVC,但是若是接觸PMMA和PS會微溶其表面造成發白霧化並不可修復。無水甲醇、乙醇、異丙醇和其他有機溶劑都是絕對禁止接觸以上兩種透明材料的,請酌情參考。清洗樹脂鏡片和玻璃鏡片方法相似只需要用淘米洗菜的洗潔精兌水後輕輕擦拭表面油污再沖洗即可,有條件的也可以花幾十元買一個超聲波清洗機備用。這是透明亞克力和有機板浸潤無水乙醇後變白的不良現象表面已經粗糙了。
❼ 樹脂怎麼洗干凈
油性的用苯類溶劑,如甲苯、二甲苯,水性樹脂就用酒精、乙醇類的洗。環氧樹脂,用二甲苯或者苯,200#溶劑油,正丁醇也行。環氧樹脂加固化劑在沒有固化前可以用常用的有機溶劑。用丙酮浸泡膠層可以變軟。無水酒精或丙酮擦拭即可。可高溫加熱,剝開,殘留在表面的膠層用丙酮浸泡擦洗即可。
1、要是油性的用苯類溶劑,如甲苯、二甲苯,水性樹脂就用酒精、乙醇類的洗。
2、是環氧樹脂,用二甲苯或者苯,200#溶劑油,還有正丁醇也行。
3、環氧樹脂加固化劑在沒有固化前可以用常用的有機溶劑(酒精、丙酮、甲苯、香蕉水、汽油等等都可以洗掉。)
4、用丙酮浸泡膠層可以變軟。清洗方法:用無水酒精或丙酮擦拭即可。有環氧樹脂脫除劑很貴的沒必要,可以高溫加熱,(普通的環氧膠耐熱都不行)然後剝開,殘留在表面的膠層用丙酮浸泡擦洗即可。
❽ 擦樹脂眼鏡可以用95%濃度的酒精嗎
用醫葯酒精的...但擦了後要馬上沖水,而且盡量不要碰到鏡架..
在家的話其實不用酒精,用洗潔精加水就可以了.眼鏡店中那個超聲波洗鏡機里的就是洗潔精水