1. 如何提升雞苗養殖免疫效果
通常雞苗養殖專業戶對疫病的防疫都有嚴格的免疫程序,但是也避免不了免疫失敗情況,致使大量雞死亡,給雞苗養殖生產造成了較大損失。搜牧小編就介紹幾種提高雞群免疫質量的方法供廣大養殖戶在生產實踐中參考。
1. 疫苗的選擇
合格的疫苗是免疫成功的關鍵。近些年來隨著養殖業的不斷發展,疫苗企業也日益增多。有的廠家只是單純的追求利潤,而忽視了疫苗的質量,從而影響了免疫效果,造成了免疫失敗。所以養殖戶一定要通過正規渠道購買正規廠家的商品。另外,確認過期、瓶塞破損和變質的疫苗絕不能使用。
2. 疫苗的使用及保存
一般來講,正規廠家生產的疫苗說明書上對各種疫苗的稀釋劑、稀釋倍數及稀釋方法,都有明確的規定,必須嚴格按說明操作。稀釋疫苗一般用滅菌的生理鹽水、蒸餾水或冷開水,如果用自來水對疫苗進行稀釋,則會影響疫苗的活性,造成免疫失敗。另外,弱毒苗和濕苗應保存於-15 ℃以下,滅活苗、類毒素和耐熱凍干弱毒苗應保存在2℃~8℃。
3. 免疫程序的制定
各養殖戶在制定免疫程序時,首先,要考慮本地疫病的流行情況和疫病流行的季節性,確定在疫病發生前的一段時間使用疫苗;其次,要掌握雞群整體情況,在機體免疫效果最佳的時間使用,如雞馬立克疫苗必須在1 日齡即剛出殼後24 小時內使用,法氏囊疫苗在10-15 日齡、25-30 日齡使用;最後,要考慮抗體的影響,必要時要藉助抗體檢測,根據抗體水平來確定免疫的最佳時間。另外,在制定免疫程序時一定要注意疫苗干擾現象的發生。
4. 免疫途徑的選擇
目前常用接種方法有,點眼、滴鼻、刺種、塗肛、皮下或肌肉注射,飲水法及氣霧法等。不同的疫苗選用不同的方法,當然免疫效果也不同。養殖戶如何選擇合適的免疫方法呢?
點眼滴鼻多用於弱毒苗的免疫。此法優點是,免疫均勻度高,可以提高局部免疫和全身免疫(細胞免疫、體液免疫);缺點是,要逐只接種,產生的免疫抗體效價較低,需要多次接種。新城疫Ⅵ和傳染性支氣管炎疫苗多採用此種方法。
刺種一般只適用雞痘疫苗。剌種雞痘疫苗後,可在免疫5 天~7 天後檢查剌種處有無紅色小腫塊,若未見小腫塊,應重新補種。
對於雞傳染性喉氣管疫苗而言,塗肛接種免疫效果好於點眼法, 而且不會出現嚴重的接種反應;但產生免疫力慢。應用塗肛免疫一定注意防止交叉感染。
注射是應用較為廣范的一種免疫方法。其中皮下注射主要通過淋巴管吸收,吸收緩慢;肌肉注射通過血管和淋巴管吸收,產生免疫力的速度較快,是緊急接種的理想途徑,也是滅活苗通常採用的接種方式。此方法優點是計量准確,可產生高且均勻都的抗體;缺點是,工作量大,且容易造成組織壞死。此種方法操作過程中一定要注意注射器的消毒,盡量做到一隻一針,防止交叉感染。
飲水是最方便的疫苗接種方法,特別適於大型雞群。此法缺點是,免疫效果的不均勻,不適於初次免疫。疫苗溶解後,應確保2 小時內飲完,天氣炎熱時,應盡量選擇清早接種。疫苗溶液不得暴露於陽光下。
氣霧免疫對嗜呼吸道的凍干疫苗來說效果好於其他方法。此法優點是,省時省力,且能夠產生很好的局部免疫和全身免疫;缺點是,對動物的應激大,易誘導雞群發生呼吸道病,實驗證明氣霧免疫引起的應激反應與霧粒的大小成反比,因此有呼吸道病史的雞場,更適於採用較大霧滴的氣霧免疫或其它途徑。為了減少氣霧免疫的應急反應,廣大養殖戶可以在免疫接種前後飼喂抗生素和維生素。
5. 飼養管理的加強
搞好環境衛生免疫接種只有在環境衛生良好的情況下才能發揮最佳效果。當機體抗體水平不高別是處於免疫空白期時,抵抗力低,此時養殖戶如不注意養殖環境的消毒,就容易造成雞群的感染。減少應激飼養管理條件突變,如過冷、過熱、強光、轉群、投葯、免疫接種等均可導致雞群的應激反應,直接影響免疫接種的效果。因此,免疫接種前後盡量不安排轉群、斷喙;並要注意減少噪音;控制好飼養溫度、濕度、飼養密度;勤通風;盡量給雞群創造一個清潔、穩定、適宜的良好環境。
如遇到不可避免的應激時,可提前在飼料中添加電解多維或溴化鈉、羥丁酸鈉等抗應激葯物。但在免疫接種前2d和後3d 不宜飼喂抗菌葯物、抗球蟲葯和抗病毒葯以及進行帶雞消毒,以免影響疫苗的免疫效果。加強日常營養平時要注意雞群的營養狀況,適當時候給予營養充足的全價配合飼料,避免因為營養缺乏造成免疫力低下,影響免疫效果。
2. 松樹籽對人身體有哪些好處
松子內含有大量的不飽和脂肪酸,常食松子,可以強身健體,特別對老年體弱、腰痛、便秘、眩暈、小兒生長發育遲緩均有補腎益氣、養血潤腸、滋補健身的作用。
治療燥咳、吐血、便秘等病。《日華子本草》載「逐風痹寒氣,虛羸少氣,補不足,潤皮膚,肥五臟」。《玉楸葯解》載「潤肺止咳,滑腸通便,開關逐痹,澤膚榮毛」。可見常食松於能延年、美容。凡脾虛便溏、腎虧遺精、濕痰甚者均不宜多食。
松樹籽是松樹的果實,又稱海松子。松子含脂肪、蛋白質、碳水化合物等。松子既是重要的中葯,久食健身心,滋潤皮膚,延年益壽。
可食用,可做糖果、糕點輔料,還可代植物油食用。松子油,除可食用外,還是乾漆、皮革工業的重要原料。松子皮可製造染料、活性炭等。
在《本草綱目》中寫道:「海松子,釋名新羅松子,氣味甘小無毒;主治骨節風,頭眩、去死肌、變白、散水氣、潤五臟、逐風痹寒氣,虛羸少氣補不足,肥五臟,散諸風、濕腸胃,久服身輕,延年不老。」可食用,可做糖果、糕點輔料,還可代植物油食用。
松子油,除可食用外,還是乾漆、皮革工業的重要原料。松子皮可製造染料、活性炭等。總之,松子是林區經濟價值很高的一寶。我國是出口松子仁的主要國家,伊春是紅松子的主產區。
3. 茶多酚的提取過程中怎樣才能減少誤差
茶多酚的提取方法 目前,茶多酚的提取方法主要有溶劑提取法、離子沉澱法、微波浸提法、超聲波浸提法、超臨界流體萃取法、樹脂吸附分離法6種[2-3] 。 2.1 溶劑提取法 溶劑提取法利用茶葉中多酚物質和咖啡鹼等有機物質在不同的溶劑中溶解度的差異進行分離,利用能與溶劑不互溶的茶多酚萃取劑將茶多酚萃取提純。其工藝路線為: 茶葉粉碎--浸提--有機溶劑脫色、脫咖啡鹼--乙酸乙酯萃取--回收溶劑乾燥--茶多酚[4] 常用的浸提劑為水或者水與其他有機溶劑互用,並得出水與有機溶劑互用比純水用作浸提劑效果要好。溶劑萃取法優點是:(1)容易實現工業化,整個操作工藝流程可以為間歇或者連續生產且穩定可靠;(2)有機溶劑可以回收利用。缺點主要有:(1)得率較低,往往採用其他手段來提高其得率;(2)較高溫度的浸提條件使得產品在提取過程中易氧化,產品純度也比較低;(3)茶多酚中咖啡鹼的含量是一項很重要的指標,氯仿在工藝中用作咖啡鹼的脫除,氯仿等有毒的有機溶劑的使用影響到茶多酚的質量和應用范圍(如不能用於食品工業),同時大量有毒、易燃的有機溶劑對生產安全產生一定隱患;(4)萃取工藝一般採用多級萃取操作,溶劑回收需要進行多級蒸餾,工藝操作復雜,能耗大。 2.2離子沉澱法 離子沉澱法是利用茶多酚在中性或鹼性條件下可以跟跟金屬離子Al3+ 、Bi3+ 、Ca2+ 、Ag+ 、Hg2+ 等產生絡 合沉澱的特點,使其從浸提液中分離出來,從而與水溶液中的咖啡鹼、單糖、氨基酸等組分分離,得到純度較高的茶多酚[5] 。其一般工藝路線為: 茶葉原料—乙醇提取—減壓過濾—金屬離子沉澱--酸溶—乙酸乙酯萃取--濃縮—真空乾燥—精製茶多酚 [6] 採用茶多酚與沉澱劑絡合沉澱從而純化茶多酚的優點在於:(1)產品純度高;(2)減少了大量有機萃取劑的使用,減少一定量的能耗;(3)工藝流程上來看,包含了有機溶劑以及沉澱劑的回收利用,工藝簡單易實現,沉澱劑等輔料成本較低。缺點在於:(1)金屬離子的使用限制了茶多酚的應用范圍,某些殘留在茶多酚中有毒金屬離子含量較高,其產品不能為醫葯行業所接受;(2)在生產過程中大量廢渣的產生無疑對環境造成巨大壓力;(3)轉溶過程中程序較為繁瑣,導致部分多酚被氧化,降低得率; (4)生產設備條件要求苛刻,對生產裝臵,輔助設備以及管路的耐腐蝕性有較高的要求。 2.3微波浸提法 該法的基本原理是利用分子在微波場中發生高頻的運動,擴散速率增大,從而將茶多酚等浸提物在微波的作用下快速浸取出來。使用微波萃取的優化條件為80o C,固液比為1:15,時間1.5min[7] 。王瑩採用微波輔助萃取技術提取日照綠茶中的茶多酚,提取率高達14.21%[8] 。Ezzohra Nkhili等比較了微波輔助水提取(MWE)和傳統的加熱輔助水提取(CWE)兩種方法對茶多酚提取的影響,結果表明,用MWE方法提取的茶多酚含量高於CWE 方法,特別是EGCG的含量達到77.14 mg/g,高於用CWE方法的64.18 mg [9] 。 利用微波輔助浸提,可縮短浸提時間,避免了茶多酚的氧化,有效地保護原料中的活性成分;提取率高,節約了溶劑,大大提高了提取效率;避免使用有毒溶劑、產品安全。微波輔助萃取技術節省能源,省工、省時、對環境友好、宜於批量浸提、便於推廣等優點,是一種可持續發展的技術。 2.4超聲波浸提法 超聲波輔助提取茶多酚,最佳條件為70o C,lOOW超聲輻射下用80%乙醇按料液比1:10提取20min [10—11] 。提取的茶多酚含量較高,防止茶多酚被氧化,保持高品質。工藝過程為: 茶葉+乙醇—超聲提取—過濾—蒸發濃縮—氯仿萃取—乙酸乙酯萃取—蒸發回收酯—烘乾的粗茶多酚 --純化[12] 超聲波提取茶多酚的工藝簡單,尤其是結合溶劑法、沉澱法和樹脂吸附法用於提取制備,取得了較好的成效。該方法具有提取溫度低、減少浸提所需時間,提高浸提效果,避免茶多酚在長時間高溫下氧化的可能,回收率高、氧化損耗小,節時、節能、提取率高等優點,同時避免了有毒溶劑的使用,提取工藝成本低,綜合經濟效益顯著,具有良好的工業推廣價值 。 2.5超臨界流體萃取法 超臨界流體萃取法是一種新型分離方法,利用溫度和壓力略超過或靠近臨界的介於氣體和液體之間的流體作為萃取劑,從固體或液體中萃取某種高沸點和熱敏性成分,達到分離和提純的目的 [13] 。工藝過程為: 茶葉--茶汁--濃縮--超臨界CO2萃取--有機溶劑萃取--酯相濃縮乾燥--超臨界C02萃取--茶多酚[4] 。 超臨界CO2流體萃取法提取茶多酚與其他的提取分離技術相比較,其主要的優點是:(1)採用CO2:作為萃取劑,大大降低了工藝對環境的污染,產品中幾乎沒有毒金屬或者有機溶劑的殘留,目前超臨界流體是唯一能取代毒性較大的有機溶劑對咖啡鹼等進行萃取的物質;(2)萃取條件溫和,有效地防止茶多酚的氧化。其主要的缺點是: (1)兒茶素等在非極性的超臨界CO2 流體中溶解度很低,往往需要用到醇類溶液作為夾帶劑,提取率和純度不高;(2)萃取設備條件比較嚴格,往往需要特定設計,工藝投資額大,生產成本比較高,目前工業化只能小規模生產,萃取物要經過多次精製才能提純。 2.6樹脂吸附分離法 樹脂吸附法分離原理是根據吸附樹脂對多酚類有選擇性吸附、解吸作用的特性來實現茶多酚與其它浸提物組分之間的分離。樹脂吸附法對樹脂的種類以及結構有較高要求,多孔樹脂的比表面積、孔隙率以及樹脂的極性都影響了對茶多酚的吸附容量。極性多酚易與極性樹脂以氫鍵等方式進行締合,再將吸附了茶多酚的樹脂用合適的有機溶劑進行洗脫,然後用乙酸乙酯等將洗脫液進行萃取,從而有選擇性地將茶多酚從其浸提液中分離。其工藝流程為: 茶葉--熱水提取--濃縮--吸附柱吸附--解脫劑洗脫--茶多酚洗脫液減壓蒸餾回收溶劑--真空乾燥--粉狀粗茶多酚--水溶解成溶液--乙酸乙酯提取--減壓蒸餾回收溶劑--真空乾燥--粉晶態茶多酚[4] 。 樹脂吸附法分離茶多酚的優點為:(1)選擇茶多酚產物中一種或幾種的兒茶素目標性強,可以有選擇地進行吸附分離目標兒茶素; (2)純度高,同時對咖啡鹼的脫除率高;(3)產品的應用范圍廣;(4)樹脂吸附一解吸過程一般都在比較溫和的溫度下進行,避免了茶多酚的損失;(5)過程中避免了有毒有機溶劑的使用並且容易回收,此方法是目前茶多酚清潔化生產的主要研究趨勢。主要的缺點為:(1)樹脂再生的重復使用率限制了樹脂吸附法生產茶多酚的規模,因此往往只能適合小規模的生產;(2)樹脂的價格昂貴給生產成本造成了壓力;(3)整個過程中使用了大量的有機溶劑,脫附過程往往較繁瑣。 6結論與展望 茶多酚作為一種天然的抗氧化劑,在食品、化妝品、保健品等應用領域的需求逐步的擴大。目前部分已經工業化的提取純化工藝相對比較落後,都存在著一定的弊端,有毒有機溶劑以及某些重金屬離子都會限制茶多酚製品在食品或者醫葯方面的應用;大孔徑樹脂吸附法以及超臨界CO2流體萃取法是比較熱門的方法,但是巨額成本及操作費用限制了茶多酚生產的規模化。理想的茶多酚提取純化工藝技術應該滿足工藝過程簡單,操作方便,且安全性好,提取率高,產品純度好,無毒性或毒性小,適應工業生產需要等要求,所以新型茶多酚提取純化工藝有待於進一步開發研究。 (1)新型萃取劑的開發應用到茶多酚的提取中。雙水相萃取技術是新出現的一種極有前景的新型分離技術,與離子液體、超臨界流體並稱為21世紀3大綠色溶劑。與傳統的有機溶劑萃取劑相比,雙水相萃取技術分相時間短,有助於活性物質在兩相中的質量傳遞,幾乎沒有溶劑殘留問題,產品對人體無害,工藝易於放大和連續操作,能夠為生物活性物質提供一種溫和的環境,不易使茶多酚氧化失活。雙水相的種類以及組成,茶多酚、咖啡鹼等在雙水相中的分配關系是雙水相萃取茶多酚今後研究的重點。 (2)超大孔連續床用於茶多酚的純化。超大孔連續床內有許多尺寸達數微米至數百微米的超大孔隙,並可在孔隙內進行化學修飾,使其可以與茶多酚形成氫鍵,使原料液中細胞碎片等固相順利通過,並可實現與目標物進行締合,從而有效分離出目標茶多酚,且成本較低,可以將離心、過濾、濃縮和層析分離多個步驟集於一體,目標物在床內的停留時間短,選擇性強。超大孔連續床的制備以及孔隙內的化學修飾一直是新型生物分離的關鍵,床體的強度、尺寸以及再生等都有待於進一步研究。
4. 刺五加葉子的成分
刺五加為五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.etMaxim)性Harms的乾燥根及根莖,莖、葉也可作葯用。刺五加商品名為五加參,是我國東北地區典型的葯用植物,味辛、微苦、性溫。無毒。主要分布在我國黑龍江、吉林、遼寧、河北等地。樹皮作五加皮入葯。刺五加具有益氣健脾、補腎安神、益精壯骨之功效。本草綱目稱刺五加為「本經上品」,能「補中益氣,堅筋骨強意志,久服輕身耐老」。刺五加全國年需求量500萬公斤以上,以刺五加為原料的中成葯種類繁多,如刺五加片、刺五加註射液。安神補腦膠囊、腦安片等;另外中醫處方對刺五加需求量也較大,使刺五加的市場供應日趨緊張。自50年代以來,以中醫葯理論為指導,在豐富的傳統用葯經驗的基礎上,從本草考證、資源分布、引種繁殖、生葯鑒定、化學成分、生化葯理、制劑生產及臨床等各方面進行了有計劃的研究工作。通過大量的研究和實驗,人們對刺五加的活性物質及其葯理作用做了深入研究。本文對其化學成分、葯理作用及提取分離簡述如下。
1、化學成分
1.1 苷類
刺五加根和根莖的主要成分為酚苷類化合物。實驗證明刺五加總苷是其生物活性成分之一。總苷在根和根莖中的含量分別占干葯材重量的0.6%~0.9%和0.6%~1.5%已分離出七種刺五加苷(A、B、C、D、E、F、G),分別為胡蘿卜苷(A),紫丁香酚苷(B),7-羥基-6,8-二甲基香豆精葡萄糖苷(B1),乙基半乳糖苷(C),紫丁香樹脂酚二糖苷(D和E)含量比例8:30:10:12:4:2:1。最新研究證明莖中刺五加苷B苷E的含量高於根部。2O世紀90年代初Kujawa等又從刺五加根的甲醇提取物中分離到兩種新皂苷。近些年對刺五加莖葉的研究不斷深入,從葉中分離得到齊墩果酸為配基的五加葉苷I、K、L和M等。而齊墩果酸被認為是我國目前首次從植物中發掘出來的治療急性黃疽性肝炎和慢性病毒性肝炎較理想的葯物,研究表明齊墩果酸也存在於刺五加莖皮中。20世紀80年代末Shao從葉中分得5種新皂苷,即刺五加苷A1、A2、A3、D3、A4。吳立軍等分得新的化合物刺五加酮(Ciwujiatongn)和新刺五加酚(necoiwujiaphenol),並首次分得阿魏葡萄苷(fereloylsucrose)。
l.2 多糖
刺五加多糖(Acathopanas senticosus Polysacharides,ASPS)包括葡萄糖、果糖、阿拉伯糖等,為免疫活性成分之一。刺五加含2%~6%鹼性多糖及2.3%~5.7%水溶性多糖。我國也從刺五加中提取出刺五加多糖PES,其中兩種多糖被命名PES-A和PES-B,分子量分別為7000和7600,PES-A的組成比,葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖-33:2:1,主要為1-3α-D-葡萄吡喃糖(Pyranoglucose)及一些1-2與1-4連接的吡喃型己醛糖。刺五加果中也含有與根多糖組成極為相似,也具有一定保肝作用的水溶性多糖。
1.3 微量元素及氨基酸
刺五加含有K、Na、Mg、Si等元素及Fe、B、Sr、Mn、Cu、Ni、Mo、Cr、Bi、Ti等多種微量元素。衛平等的分析結果表明短柄五加莖中含16種氨基酸,其中7種為人體必需的。
1.4 其它成分
趙余慶等從根皮中分離出硬脂酸、β谷甾醇、芝麻素白樺脂酸、苦杏仁苷。蔗糖以及具有促性腺和細胞素作用的活性成分Liriodenchin。從根和根皮的水提物中分得反式4,4'-二羥基-3,3-二甲氧基芪(trans-4,4'-dihydroxy-3,3,-dlmethoxystilene)和7-羥基-6,8-二甲基香豆素即異嗪皮啶(isoraxidin)。陳貌連等利用電噴霧質譜發現刺五加葉存在槲皮素苷(槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖),金絲桃苷(槲皮素-3-O-β-D-半乳糖),槲皮素和蘆丁(槲皮素-3-O-蘆丁糖)。除金絲桃苷外,其它3種為刺五加葉中尚未報道的黃酮類成分,經測定槲皮素及相關的黃酮昔類化合物在刺五加葉中含量達37.25%。
2、葯理作用
經過大量研究與實驗,表明刺五加可增強機體非特異性防循能力,除具有免疫調節、抗腫瘤。抗衰老、抗輻射、抗損傷及抗疲勞作用外,還可治療心腦血管疾病。糖尿病、神經衰弱等症。
2.1 增強免疫功能
刺五加多糖及有苷類成分均能明顯提高細胞產生誘生干擾素的能力,刺五加能增強網狀內質系統的吞噬能力和腹腔巨噬細胞的吞噬能力,提高玫瑰花結的百分率,多糖成分能明顯增加CTL殺傷靶細胞的活性,促進ConA(伴刀豆素A)刺激的小鼠脾細胞分泌白細胞介素-2。多糖具有多種生物活性,是理想的免疫增強劑,它能促進T細胞、B細胞、NK細胞、M細胞等細胞的功能,還能促進白介素、干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子的產生。
2.2 抗疲勞作用
大鼠負重遊泳試驗及小鼠爬繩法試驗表明,刺五加提取物及苷類物質具有明顯的抗疲勞作用,其作用比人參強。同時證明本品苷的抗疲勞作用強於粗提物,說明抗疲勞的活性成分為苷類物質。
2.3 抗衰老作用
刺五加具有抗衰老作用,大鼠口服劑五加2個月後,細胞脂質氧化物含量降低,Na+-K+-ATP酶活性升高。本品乙醇提取物能延長小鼠結扎雙側頸總動脈或斷頭喘息的存活時間;能降低大鼠肝、腦中過氧化脂質的水平,提高血漿中SOD(超氧化物歧化酶)的活性,對缺血後再灌注腦內的過氧化脂質含量增加有保護作用。
2.4 抗菌、抗病毒作用
刺五加對白色葡萄球菌、奈瑟菌、大腸桿菌有一定的抑菌作用。多糖成分可增強豚鼠抗人型結核菌的能力。另外刺五加對蟬媒腦炎病毒感染也有抑製作用。但也有人報道刺五加提取物有提高腸道桿菌的能力。
2.5 抗輻射作用
刺五加能增加動物抵抗輻射的能力,能延長受輻射大鼠的生存時間,對紅細胞遭受放射樣物質侵害時有保護作用,對造血系統放射損傷後小鼠的細胞結構的恢復有促進作用。
2.6 抗應激作用
刺五加水浸膏及醇浸膏能增加小鼠對高溫和低溫的耐受力,可降低高溫或低溫應激刺激引起的小鼠死亡率。
2.7 抗腫瘤作用
刺五加的提取物對動物實驗性的移植瘤(肉瘤180、256、艾氏腹水癌等)葯物誘發瘤均有一定的抑製作用,同時能抑制癌瘤的轉移。實驗證實刺五加多糖對S180細胞磷脂醯肌醇(PI)轉換有顯著的抑製作用,其抑製作用與劑量呈正相關性,這可能是刺五加抑制腫瘤細胞增殖的作用機制之一。
3、提取分離
3.1 傳統迴流法
刺五加莖乾燥品5kg、75%迴流提取,提取回收乙醇,加適量蒸餾水稀釋後,脫脂棉濾過,經D101大孔樹脂,用水及不同濃度乙醇洗脫。其中20%乙醇洗脫部分(約63g)經硅膠柱色譜,以氯仿一甲醇梯度洗脫,分離純化得到化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ;50%乙醇洗脫部分(約30g),經硅膠柱色譜,以氯仿一甲醇梯度洗脫,分離純化得到化合物Ⅳ、Ⅴ,根據理化性質和譜學分析(H—NMR,13C-NMR),確定它們的結構,分別為香莘酸(I)、丁香酸(Ⅱ)、對羥基苯乙醇(Ⅲ)、異香萃醛(Ⅳ)、異秦皮啶(V)。丁香苷( VI)。趙余慶等從刺五加的甲醇提取物中分得9種化合物分別鑒定為硬脂酸、芝麻素、β谷甾醇、胡蘿卜苷、白樺脂酸、丁香苷、苦杏仁苷、蔗糖和Lirioden-drin,其中硬脂酸、白樺脂酸、苦杏仁苷首次從該植物中得到。
3.2 微波提取
王娟等人採用連續微波輔射方式進行微波萃取工藝的優選,以總皂苷和異秦皮啶的含量指標,研究微波輔助萃取刺五加的提取工藝,研究結果表明該技術應用於中葯有效成分的提取是可行的。傳統迴流法所需的淀劑較微波萃取法多,且加熱時間為微波萃取法的24倍,雖然在微波萃取法中干浸膏得率較低,但對於我們所關注的指標成分異秦皮啶含量,卻比傳統方法高出2倍,總皂苷含量則略高一些。這主要是因為在加熱時間較長的情況下,原料中的澱粉、糖類等雜質溶出更多,從而導致比傳統加熱迴流法中干浸膏得率高些。在傳統加熱迴流方式中,熱量傳遞由外向內,而微波萃取中傳熱和傳質的方向均由內向外,因此微波萃取法更有利於有效物質的溶出。李芙蓉、呂博首運用微波技術從刺五加中提出刺五加多糖,並對其含量進行了測定,多糖含量為5.01%。
3.3 超聲提取法
李慶勇等人通過超聲波法提取刺五加根莖中丁香苷的試驗,確定最佳試驗條件為:水為溶劑,溶劑用量8ml/g,超聲提取20min,提取溫度為室溫。此法成本低,提取反應在常溫下進行,提取時間短,提取率也較高。用此法提取了香苷不僅簡便快捷,而且可靠性強。
3.4 色普技術
吳立軍等人利用各種色譜技術對刺五加莖葉化學成分進行分離純化,根據理化性質和光譜數據進行結構鑒定,得到3個化合物,分別鑒定為新刺五加酚、阿魏酸葡糖苷、香苷,阿魏酸葡糖苷為新化合物,香苷為自然界首次分離。
3.5 高效液相層析(HPLC)
劉麗春等人利用HPLC梯度洗脫法,同時測定刺五加註射液中刺五加苷B和刺五加苷E的含量,試驗證明此法快速、靈敏、准確。刺五加的化學成分及其葯理作用證明總苷及多糖為主要活性成分,現代科學技術將為刺五加的進一步研究提供廣闊的空間。