㈠ 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。
㈡ 超濾膜如何除氨氮
氨氮的分子量很低,幾乎接近水,所以可以直接穿透超濾膜的,如果回你需要去除氨氮,最答好對污水進行曝氣處理,這樣可以讓氨氮通過微生物轉化成硝酸鹽,硝酸鹽的水再和氨氮的水混合,會在反硝化菌條件下變成氮氣釋放,這樣所有的氨氮會大幅度下降,同時總氮也能下降。
㈢ 什麼是超濾
超濾膜屬於毛細管式中空纖維膜,是以高分子材料經特殊的膜製造工藝生產的不對稱半透回膜,它是答一種不產生相變的分離方法,其所用的制膜材料為改性PVC、PAN或者PVDF,具有良好的機械性能和耐熱、耐化學性能以及較強的抗污染能力。它的切割分子量為10萬道爾頓,超濾膜絲內徑0。 9mm,外徑1。6mm,屬內壓式過濾,即原液先進入中空膜絲內部,經壓力差驅動,沿徑向由內向外滲透過中空膜絲,從而濾除原液中的各種細菌、膠體、雜質等大分子物質。
㈣ 超濾凈水器怎樣知道內部超濾膜漏水
RO膜式唯能與有效去處水各種污染物水處理方式從處理效上說當反滲透好
㈤ 超濾膜如何檢測質量
透氣率檢測:
(一)抽樣方法抽樣方法抽樣方法抽樣方法:
1.隨機抽取2根中空纖維膜。其中一根膜對折後穿入樣品架子,使架子中膜的有效長度為40cm(架子分為兩邊,各長為10cm),用環氧膠將孔封住。按此方法做兩個樣品。
2.在生產工藝穩定、生產正常情況下,按以上比例抽檢;非正常情況下可提高抽檢比例。
(二)檢驗方法:
1.內徑、壁厚測定壁厚測定壁厚測定壁厚測定:顯微鏡檢測,用刀片切一段2mm左右的膜豎立在載玻片上,放大10×10的倍數測定樣品的內徑、壁厚,至少測試樣品三段,記錄,取平均值計算。
2.透氣率測定步驟透氣率測定步驟透氣率測定步驟透氣率測定步驟:
(1)將樣品裝入透氣率測定儀的滲透池內,旋緊;
(2)確認透氣率測定儀的進樣閥、進樣調節閥和U形差壓計進氣閥處於關閉狀態;
(3)開N2鋼瓶,調節鋼瓶輸出壓力為0.3~0.55Mpa;
(4)開透氣率測定儀進樣閥,緩慢調節進樣調節閥,至壓力表讀數為0.2kgf/cm2;
(5)系統氣密性檢驗:用皂沫檢驗所有管路、接頭、閥門和密封面,不得有漏氣點;
(6)緩慢開啟U形差壓計進氣閥,調節進樣調節閥至U形差壓計讀數為15.0cmHg;
(7)按壓皂沫流量計下端的鼓泡橡膠頭,使皂沫產生,沿皂沫流量計內壁上行使其內壁充分濕潤;
(8)控制皂沫流量計產生單個氣泡,用秒錶記錄單個氣泡通過一定體積所需時間;
(9)每一樣品測完後,關進樣閥和U形差壓計進氣閥,換下一個樣品裝入滲透池,重復(1)~(9)操作;
(10)每天所有樣品測完後,關N2鋼裝,並將管路中剩餘氣體排空;(11)每天測試時,先測保留樣的透氣率,作為參照;
(11)每個樣品至少重復三次,取平均值計算。
㈥ 流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白.B
1、選擇合適的超濾來管,主要考源慮MWCO和濃縮體積,最常見的是Ultra-15(10kD)。 通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。 若目的蛋白分子量為10kD左右
㈦ 超濾膜凈水器的使用方法是怎樣的
第一步:將二分進水閥和自來水管相連將自來水的水管關上,然後開始進行安裝步驟。首先,將二分進水球閥和自來水管相連,最好是纏上生膠帶以免漏水。
第二步:PE管一頭與自來水管相接,另一頭與超濾凈水器相連在鏈接的過程中要注意鏈接要貼合,以防出現漏水的現象;其次就是要注意PE管的長短度,不能留得太長,也不易留得太短,根據實際情況合適就行。
第三步:將能量機的三個堵頭取下,進行PE管的鏈接在鏈接的過程中要注意將藍色的小卡子與能量機卡好,以免到時候由於水壓等原因導致漏水。
第四步:廢水閥的鏈接在廢水閥的鏈接過程中也要注意PE管的長短,另外在鏈接時也得將藍色的卡扣卡好,以免漏水
第五步:鵝頸龍頭的安裝在安裝鵝頸龍頭時要注意螺絲的固定,以免以後會出現松動的情況。
第六步:將超濾凈水器的凈水出水口與鵝頸龍頭鏈接鏈接是用3分的PE管鏈接,鏈接的PE管不要太長,在兩頭介面處要注意,不要鏈接松動出現漏水的情況。
第七步:先找到盛水的東西,然後將水閥打開進行沖洗在沖洗過程中要注意觀察水質變化情況和檢查是否有漏水現象。如果有要及時進行處理。
第八步:沖洗時間大概10-20分鍾,直至出現清水為止剛剛開始時雖然是出清水了,但是還是建議大家不要直接飲用,還是燒開為好。
㈧ 怎樣判斷超濾膜被洗壞了
用壓縮空氣試一下就知道了,內壓式的超濾膜,從出口加壓,入口的澆注面超濾膜口有氣泡說明有膜破掉了,這個冒泡的點堵上就行了。
一般從出水水質就看得出了,有應該能濾掉的雜質通過就算是漏了。
㈨ 我今天買了一台五級超濾機!我發現超濾膜的包裝會透氣啊!沒密封好!請問有問題的嗎
這個真的不好說。要看你的超濾膜是什麼材質的。如果是中空纖維的超濾膜,據回我所知膜絲一答旦濕潤之後是不允許再乾燥的,否則會造成永久損害。所以你要檢查下密封損壞是什麼原因造成的,裡面的膜有沒有涼干。還有密封損壞是否已經導致污染。
另外,友情提示下,不管商家吹噓的幾級過濾機。最重要的是要定期清洗,定期更換濾芯。不要以為上了凈水機就一勞永逸了哦。
㈩ 取50ul國產Bradford溶液 ,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白.
先回答你的問題:
Bradford溶液現在自己配也行(其實就是考馬斯亮藍溶液),不過買商品化的也很多,可以買Bradford蛋白定量試劑盒之類的東西。可以用這個試劑檢測溶液中蛋白的濃度。如果要自己配,可以參考:http://..com/link?url=7UwTia_b3FPpAaia
在用超濾管的時候,保留在上方的是所需蛋白樣品,超濾膜下方收集到的溶液就是流穿液。
這個意思應該是說,如果超濾完全保留蛋白,流穿液中理論是沒有蛋白的,所以加入bradford溶液(棕紅色)是不應該引起溶液變色的。但是如果有蛋白,會與Bradford溶液反應,變成藍色。但是也有問題,超濾膜只能保留一定分子量以上的蛋白,如果截留分子量比較大,例如30K或者更大,有一些小的蛋白還是會進到流穿液的,會產生變色反應,而且肉眼觀察變色,也沒有辦法給出具體蛋白的量,可能還是用儀器檢測一下比較好。